Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad 8

Jednocześnie, skoniugowany z wodorotlenkiem glinu (25 mg / oko) ekstrakt Fel d1 (200 jednostek / ml) podawano miejscowo do oka w dniach 1, 2, 3, 7 i 14. Następnie myszy poddano miejscowo ekspozycji na ekstrakt Fel d1. (200 AU / ml) bez ałunu raz w tygodniu. Osiem tygodni po początkowym uczuleniu, oczyszczony przez powinowactwo Fel d1 (0,5 mg / ml) wkroplono do mysich oczu (5 .l / oko) przez 3 kolejne dni do końcowego testu. W przypadku myszy C57BL / 6, ostateczne próby prowokowano w 10. Continue reading „Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad 8”

Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad 7

Wartości są wyrażone jako średnie. SEM. Aby odbierać sygnały kosztowe z MIP-1. bezpośrednio, komórki tuczne spojówki będą musiały wyrażać receptory CCR1 lub CCR5. Podczas poprzednich eksperymentów in vitro wykazujących bezpośrednią aktywację komórek tucznych za pomocą MIP-1. Continue reading „Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad 7”

Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad 6

Każdy objaw kliniczny, obejmujący obrzęk spojówek, obrzęk powieki, zaczerwienienie spojówek i łzawienie, został zmniejszony przez leczenie przeciwciałem. (C) Częstotliwość degranulacji mastocytów po prowokacji alergenem również była znacznie zmniejszona (n = 12 na grupę, P <0,05). (D) Rekonspirację późną fazą komórek tucznych oceniono również u myszy WT i po MIP-1. blokada w 24 godziny po prowokacji. Rekrutacja komórek tucznych była znacząco hamowana przez leczenie przeciwciałem (n = 12 na grupę; P <0,05). Continue reading „Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad 6”

Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad 5

Komórki myszy WBB6F1-KitW / KitW-v (W / Wv) lub WT WBB6F1 + / + z niedoborem komórek tucznych immunizowano zgodnie z naszym standardowym protokołem i oceniano pod kątem natychmiastowej reakcji nadwrażliwości na prowokację alergenem według 3 kryteriów: objawy kliniczne, maszt degranulacja komórkowa i wysięk osocza (Figura 5). Myszy W / Wv (pomimo montowania normalnej odpowiedzi IgE) wyraźnie wykazywały znacznie zmniejszoną odpowiedź we wczesnej fazie, niezależnie od monitorowanego kryterium (Figura 5A). Indukcja każdego objawu była podobnie upośledzona u myszy W / Wv, co potwierdza pogląd, że każde z tych kryteriów okulistycznych jest dobrymi wskaźnikami funkcji komórek tucznych (Figura 5B). Analiza histologiczna wyraźnie wykazała, że komórki tuczne ulegają anafilaksji. degranulacja u myszy WBB6F1 + / +, podczas gdy nie wykryto żadnych komórek tucznych w spojówkach myszy W / Wv (dane nie pokazane). Continue reading „Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad 5”

Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych czesc 4

Podczas gdy podstawowy szczep myszy opracował jasne parametry ostrego zapalenia podczas okresu uczulenia, myszy z niedoborem MIP nie wykazały klinicznych objawów natychmiastowej nadwrażliwości. Co godne uwagi, myszy z niedoborem MIP-1. Were były niemal pozbawione ostrego stanu zapalnego po ostatecznym prowokacji (Figura 3). Każdy objaw klinicznej choroby. obrzęk spojówek, obrzęk powieki, zaczerwienienie powiek, łzawienie / rozładowanie i mrużenie oczu. Continue reading „Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych czesc 4”

Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych cd

Obszar wokół oczodołów wokół nerwu wzrokowego kryje znaczną, ale znacznie mniejszą liczbę komórek tucznych. Aby zbadać charakter komórek wytwarzających MIP-1 (3 i ich zależność przestrzenną od komórek tucznych, przeprowadziliśmy analizę hybrydyzacji in situ MIP-1. ekspresja genów na seryjnych odcinkach biopsji spojówkowych wraz z analizą histologiczną / morfologiczną komórek składowych (16, 18). Sygnał dodatni MIP-1 (3 pozytywny był zlokalizowany głównie w komórkach jednojądrzastych w obrębie istoty właściwej korzenia powieki (Figura 1A) w bliskim sąsiedztwie rezydentnych komórek tucznych. Co zaskakujące, nie wykryliśmy MIP-1. Continue reading „Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych cd”

Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad

Doświadczenia pasywnej sensytyzacji z zastosowaniem komórek tucznych ex vivo i komórek RBL-2H3 pozytywnych względem CCR1 pokazują bezpośrednio, że MIP-1. służy jako sygnał do stymulacji degranulacji komórek tucznych. Wyniki Nasze obecne rozumienie aktywacji komórek tucznych wynika w dużej mierze z badań wykorzystujących komórki mastocytów (14) wytwarzane in vitro, komórki szpiczaka (14) lub linie komórek tucznych, głównie komórki RBL-2H3. Badania ex vivo lub natywnych komórek tucznych były bardziej ograniczone i zostały ograniczone do tych oczyszczonych z niewielkiej liczby tkanek, takich jak skóra i płuca (15). Podczas gdy badania te dostarczyły niezwykle szczegółowy obraz wymagań aktywacji komórek tucznych i transdukcji sygnału, niektóre aspekty aktywacji komórek tucznych in vivo mogą być nieobecne na tym obrazie. Continue reading „Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad”

Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych

Regulacja odpowiedzi immunologicznej wymaga współpracy wielu sygnałów w aktywacji komórek efektorowych. Na przykład, limfocyty T wymagają sygnałów pochodzących zarówno z TCR dla antygenu (po rozpoznaniu MHC / peptydu antygenowego) i receptorów dla cząsteczek kostymulujących (np. CD80 i CD60) dla pełnej aktywacji. Tutaj pokazujemy, że reakcje IgE-zależne w spojówce również wymagają wielu sygnałów. Natychmiastowe reakcje nadwrażliwości w spojówce były hamowane u myszy z niedoborem białka zapalnego makrofagów. Continue reading „Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych”

Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy ad 9

W celu łatania, przeprowadzono trzecią inkubację z anty-króliczym Texas Red. Skoniugowanym przez 30 minut na lodzie. Następnie limfocyty B, w stężeniu 0,4 x 106 / ml, umieszczono w objętości 50 ul / studzienkę na szkiełkach powlekanych poli-L-lizyną (Poliscience Inc.). Równą objętość 4% paraformaldehydu dodano w ciągu 10 minut w temperaturze pokojowej w celu utrwalenia komórek. Ustalone komórki następnie przemyto dwukrotnie PBS i permeabilizowano 0,1% Triton X-100 przez 4 minuty. Continue reading „Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy ad 9”

Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy ad 8

Ekspresję białkową kinaz Src oznaczono ilościowo za pomocą analizy densytometrycznej z użyciem przyrządów ImagerMaster VDS (Amersham Pharmacia Biotech). IP i aktywność kinazy in vitro różnych kinaz Src. W celu przeanalizowania całkowitej aktywności komórkowej różnych kinaz Src, komórki (2 x 106 dla każdego oznaczenia) ponownie zawieszono i poddano lizie przez godzinę w 4 ° C w 450 ul buforu B zawierającego 20 mM Tris / HCl, pH 7,5, 10% glicerol, 1% Triton X-100, mM EDTA, 50 mM NaCl, mM ortowanadan sodu i koktajl inhibitora proteazy. Po odwirowaniu supernatanty inkubowano przez 2 godziny w temperaturze 4 ° C z odpowiednim przeciwciałem kinazy Src związanym z białkiem Aa-sefarozą. Immunokompleksy przemyto 3 razy przez odwirowanie i ponownie przeprowadzono w stan zawiesiny w buforze C (50 mM Tris / HCl, pH 7,5, zawierający koktajle fosfataz i inhibitorów proteazy). Continue reading „Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy ad 8”