ABCG1 i HDL chronią przed dysfunkcją śródbłonka u myszy karmionych dietą bogatą w cholesterol ad 10

Czterdzieści osiem godzin po transfekcji, HAEC traktowano 7-KC w obecności lub nieobecności HDL. Analiza masy steroli. Frakcje lipidowe aorty brzusznej, izolowane EC lub nie-EC z aorty i HAEC ekstrahowano przy użyciu heksanu / izopropanolu (3: 2 obj./obj.) W obecności stigmasterolu dodanego jako wzorzec wewnętrzny. Całkowity cholesterol i 7-KC oznaczono po zmydleniu za pomocą chromatografii gazowo-cieczowej (26,35). Oznaczenie wypływu mas sterolowych. HAEC inkubowano w EGM-2 z 5% surowicą z niedoborem lipoprotein z cholesterolem (5 .g / ml) i 7-KC (5 .g / ml) przez 24 godziny. Następnego dnia komórki płukano PBS, a następnie inkubowano w EGM-2 z dodatkiem samej 5% surowicy z niedoborem lipoprotein lub suplementowano ludzką apoA-I lub HDL przez 16 godzin. Po okresie wypływu, pożywki i komórki zebrano osobno i lipidy ekstrahowano heksanem / izopropanolem (3: 2 obj./obj.) Ze stigmastanolem jako wewnętrznym standardem. Masę sterolową pożywek i komórek określano za pomocą chromatografii gazowej. Procent masowego wypływu sterolu obliczono na podstawie stosunku masy steroli w medium do całkowitej (średniej i komórkowej) masy sterolu. Test aktywności NOS. Aktywność syntezy NO określono przez oszacowanie szybkości konwersji [3H] l-argininy do [3H] l-cytruliny za pomocą zestawów otrzymanych z Calbiochem-Novabiochem zgodnie z instrukcjami producenta (52). Western blotting. Białko rozpuszczono na żelu redukującym 4% ~ 20% SDS-PAGE (Bio-Rad). Białko przeniesiono na membrany PVDF i sondowano pierwszorzędowymi przeciwciałami przez noc. W celu wykrycia poziomów dimerów eNOS, przeprowadziliśmy niskotemperaturową SDS-PAGE (4 ° C) (52, 53). Lizaty aorty myszy i lizaty HAEC ogrzewano odpowiednio do 55 ° C i temperatury pokojowej przez 30 minut w obecności SDS i 2,5% P-merkaptoetanolu. Oznaczanie ilościowe wewnątrzkomórkowych ROS. Wytwarzanie wewnątrzkomórkowych ROS oszacowano przez inkubację CM-H2DCFDA (1 .M) z komórkami 30 min przed oznaczeniem, jak opisano wcześniej (39). Statystyka. Analizę statystyczną przeprowadzono za pomocą testu ucznia. Zastosowano testy post-hoc Bonferroni. Wyniki są reprezentowane jako średnie. SEM. Materiały uzupełniające Zobacz Uzupełniające dane Podziękowania Tę pracę wspierali dotacje z NIH (HL 54591). Przypisy Niestandardowe skróty: CM-H2DCFDA, dioctan 6-karboksy-2,7-dichlorodihydrofluoresceiny, ester diacetoksymetylowy; GSH, glutation; HAEC, ludzka aortalna EC; HCD, dieta bogata w cholesterol; 7-KC, 7-ketocholesterol; L-NAME, ester metylowy NG-nitro-l-argininy; NAC, N-acetylocysteina; SNP, nitroprusydek sodu; SR-BI, receptor zmiatający BI; WTD, dieta zachodnia. Konflikt interesów: AR Tall otrzymał prowizje od firm Pfizer, Merck, AstraZeneca i Roche; opłaty wykładowe od Merck; i udzielać wsparcia Merck i Pfizer. Informacje referencyjne: J. Clin. Invest.118: 3701. 3713 (2008). doi: 10.1172 / JCI35470
[przypisy: uzależnienie od leków przeciwbólowych, kawa rozpuszczalna skład, przychodnia władysławowo ]
[hasła pokrewne: medispirant żel pod prysznic opinie, femoston mini, kamila biedrzycka osica wikipedia ]