Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad 6

Każdy objaw kliniczny, obejmujący obrzęk spojówek, obrzęk powieki, zaczerwienienie spojówek i łzawienie, został zmniejszony przez leczenie przeciwciałem. (C) Częstotliwość degranulacji mastocytów po prowokacji alergenem również była znacznie zmniejszona (n = 12 na grupę, P <0,05). (D) Rekonspirację późną fazą komórek tucznych oceniono również u myszy WT i po MIP-1. blokada w 24 godziny po prowokacji. Rekrutacja komórek tucznych była znacząco hamowana przez leczenie przeciwciałem (n = 12 na grupę; P <0,05). (E) Analiza degranulacji komórek tucznych i wyników klinicznych wykazała dodatnią korelację między tymi 2 wskaźnikami. (F) Kinetyka hamującego działania MIP-1. leczenie przeciwciałem na podstawie wyników klinicznych (100 .g / wstrzyknięcie). Wyniki kliniczne były znacznie zmniejszone w dniach 1, 2 i 3 (P <0,05). Wartości są wyrażone jako średnie. SEM. Rozszerzyliśmy nasze analizy in vivo, aby uwzględnić kinetyczne badanie wyników klinicznych w odniesieniu do pulsów neutralizujących przeciwciał MIP-1 (3 podczas przebiegu choroby (Figura 6F). Wstrzyknięcia neutralizującego przeciwciała w dniach i 3 doprowadziły do zmniejszenia objawów klinicznych. Ten efekt tłumiący został zmniejszony pomiędzy wstrzyknięciami w dniu 2. Synchronizacja osłabienia choroby z iniekcjami ponownie potwierdza bezpośrednią rolę MIP-1. na objawy kliniczne. Warto zauważyć, że nasza analiza poziomów IgE w surowicy nie wykazała różnic między MIP-1. grupa przeciwciał i grupa kontrolna (grupa Fel d1 / IgG: 1,682. 243 ng / ml, Fel d1 / grupa przeciwciał: 1,758. 151 ng / ml; n = 8), co wskazuje, że MIP-1 nie wpływało na uczulenie na alergen . neutralizacja. Podsumowując, dane te zdecydowanie sugerują, że tłumienie objawów klinicznych i degranulacji komórek tucznych przez MIP-1. blokada lub niedobór wynika z bezpośrednich efektów MIP-1. na komórce masztowej. W fazie efektorowej było również możliwe, że MIP-1. był ważny dla rozwoju terminalnej komórki tucznej i / lub zasiadania w spojówce. Pomimo rozległych analiz morfologicznych (w tym analiz różnicowych plam), nie znaleźliśmy żadnych dowodów na to, że MIP-1. niedobór wpływał na naiwną homeostazę komórek tucznych pod względem naprowadzania lub końcowego różnicowania w spojówce. Podsumowując, dane sugerują, że MIP-1. przyczynia się bezpośrednio do fazy efektorowej natychmiastowej reakcji nadwrażliwości, tj. aktywacji komórek tucznych po ekspozycji na alergen. Zgodnie z naszymi ustaleniami, nie ma doniesień wskazujących, że myszy z niedoborem MIP-1. 5 mają upośledzoną odpowiedź humoralną lub defekty w naprowadzaniu lub rozwoju komórek tucznych (28, 29). W następnej serii eksperymentów sprawdzono, czy MIP-1. może w rzeczywistości dostarczać bezpośredni sygnał stymulujący komórkom tucznym. Aby rozwiązać ten problem, zastosowaliśmy test uwalniania histaminy in vitro przy użyciu wyizolowanych komórek tucznych spojówkowych. W tym systemie biernie uczulone komórki masztu spojówkowego odpowiednio degranulują i szybko uwalniają histaminę w ciągu 30 minut po prowokacji alergenem in vitro. Testowaliśmy, czy dodatek egzogennej MIP-1. może stymulować aktywację komórek tucznych spojówki przez pomiar uwalniania histaminy. W teście do wykrywania uczulenia in vitro użyto naiwnej mysiej spojówki, aby wykluczyć możliwość jakiegokolwiek efektu fazy indukcyjnej w błonie śluzowej. MIP-1. znacząco zwiększa zależną od IgE dawkę zależną od uwalniania histaminy, a wzrost krotności osiąga plateau przy 67% maksymalnego uwalniania osiągniętego dla związku 48/80 (przy 100 ng / ml MIP-1 p, związek 48/80 stosowany jako kontrola pozytywna). ) (Rysunek 7). Jako kontrola, eotaksyna-1 nie miała wpływu na zależne od IgE uwalnianie histaminy. Dodanie MIP-1. pod nieobecność IgE sieciowanie powodowało jedynie niski poziom uwalniania histaminy. Podsumowując, dane te potwierdzają pogląd, że MIP-1. zapewnia ważny sygnał kostymulacyjny dla komórek tucznych spojówkowych. Figura 7 Zwiększenie indukowanego alergenem uwalniania histaminy przez MIP-1 .. Projekt eksperymentalny obejmował test biernej sensytyzacji przy użyciu wyizolowanej tkanki spojówki od myszy naiwnych. Górny panel pokazuje uwalnianie histaminy z uczulanej in vitro tkanki eksponowanej na eotaksynę-1 (100 ng / ml), MIP-1. (100 ng / ml) lub związek 48/80 (1 mg / ml) bez dodatku HSA-DNP (alergenu). Dolny panel pokazuje uwalnianie histaminy z uczulanej in vitro tkanki poddanej prowokacji HSA-DNP w pożywce, eotaksyna-1 (100 ng / ml) lub MIP-1. (100 ng / ml). MIP-1. suplementacja znacząco zwiększała indukowane alergenem (indukowane przez HSA-DNPa) uwalnianie histaminy in vitro uczulonych spojówek komórek tucznych, podczas gdy eotaksyna-1 lub nośnik nie wywierały żadnego działania. Roztwór 48/80 służył jako pozytywna kontrola degranulacji komórek tucznych [hasła pokrewne: balsam szostakowskiego zastosowanie, kawa rozpuszczalna skład, prostowanie keratynowe cennik ] [hasła pokrewne: tonaxinum forte na noc, czopki eva qu, aerius dawkowanie ]