Hamowanie kalpain poprawia pamięć i transmisję synaptyczną w mysim modelu choroby Alzheimera ad 7

Traktowanie podłożem nie miało wpływu na działanie myszy WT, ponieważ wykazywały one podobny czas zamrażania jak nietraktowane myszy WT kontrolne (dane nie przedstawione). Nie znaleźliśmy różnicy w zachowaniu podczas zamrażania podczas uczenia się (dane nieukazane). Wyniki te wskazują, że upośledzenie kontekstowego uczenia się strachu u myszy APP / PS1 można uratować przez traktowanie inhibitorem kalpainy. Następnie zbadaliśmy, czy korzystny wpływ hamowania kalpainy polega na działaniu przeciw negatywnym skutkom nadekspresji APP. Podobnie do plastyczności synaptycznej stwierdziliśmy, że leczenie za pomocą BDA-410 przez 3 miesiące było w stanie przywrócić normalną pamięć operacyjną i pamięć asocjacyjną u 11 do 12-miesięcznych myszy APP (Suplementowa Figura 4, A i B). Zatem prawdopodobne jest, że ekspresja zmutowanego APP odgrywa kluczową rolę w indukowaniu aktywacji kalpainy, prowadząc do późniejszej utraty pamięci. Hamowanie Calpain nie zmienia A. poziomy. Biorąc pod uwagę, że A. elewacja jest cechą charakterystyczną AD, testowaliśmy czy hamowanie aktywności kalpainy wpływa na A. poziomy. Analiza ELISA dla Ap40 i Ap42 ujawniła łatwo mierzalne poziomy tych peptydów w pożywce do hodowli neuronów APP / PS1 10 dni po wysianiu (Suplementowa Figura 5A). Pożywka hodowli myszy WT nie wykazywała wykrywalnych wartości dla A (A40 lub Ap42. W przeplatanych doświadczeniach obserwowaliśmy dalej, że traktowanie kultur myszy APP / PS1 przez 3. 4 dni za pomocą E64 lub BDA-410 nie miało wpływu na poziomy A. 40 i A. 42 (Suplementowa Figura 5A). Jako dodatkowy test zbadaliśmy poziomy we krwi A.40 i AUC42 (oznaczające rozpuszczalne i nierozpuszczalne pule tych peptydów) we krwi po 5-miesięcznym leczeniu E64, BDA-410 lub u myszy podwójnie transgenicznych i ich miotów z miotu WT. Po 7 miesiącach myszy APP / PS1 traktowane nośnikiem wykazywały wysokie poziomy A. (Dodatkowa Figura 5, B i C), podczas gdy koty z miotu WT miały niewykrywalne poziomy. Codzienne leczenie E64 lub BDA-410 między ósmym tygodniem a siódmym miesiącem nie powodowało obniżenia poziomu A lub A w mózgu lub we krwi. (Dodatkowa figura 5, B i C). Przeanalizowaliśmy również, czy inhibitory były zdolne do zmniejszenia obciążenia płytkami. Nie stwierdziliśmy zmniejszenia obszaru zajmowanego przez płytki w hipokampie lub korze mózgowej za pomocą immunohistochemii z monoklonalnym przeciwciałem 4G8, które zabarwia zarówno fibrylarny jak i rozproszony A. (Dodatkowa figura 5D), lub przez wybarwienie czerwienią Kongo w celu przeanalizowania zwartych osadów (dodatkowa Figura 5E). Nie A. depozycję (ocenianą albo przeciwciałem 4G8, albo czerwienią Kongo) wykryto u myszy WT. Łącznie dane te potwierdzają hipotezę, że inhibitory kalpainy wzmacniają funkcje poznawcze bez wpływu na poziomy amyloidu. W hamowaniu kalpainy pośredniczy fosforylacja CREB. Badania kultur komórkowych i plasterków po egzogennym podaniu Ap42, jak również dane dotyczące transgenicznych modeli zwierzęcych deponujących amyloid, wykazały zmniejszenie fosforylacji mediatora transkrypcji plastyczności synaptycznej i kluczowej cząsteczki w procesach pamięciowych, białka CREB. (19, 20, 47-59). Biorąc pod uwagę, że kalpeny mogą zmniejszać fosforylację CREB (21, 50), badaliśmy, czy inhibitory kalpainy działają na fosforylację CREB podczas plastyczności synaptycznej. Stwierdziliśmy, że w przeciwieństwie do traktowanych nośnikiem lub nietraktowanych hodowli WT (dane niepokazane), z których oba wykazały wzrost ufosforylowanego CREB (pCREB) w odpowiedzi na glutaminian (200 .M, 5 minut), hodowle z traktowanych nośnikiem Myszy APP / PS1 nie wykazały tego wzrostu fosforylacji CREB (Figura 5, A i B). Te wyniki są zgodne z poprzednio opisanymi wynikami przy użyciu egzogennej aplikacji A. (19). Jednakże, albo E64 (1.M) albo BDA-410 (50 nM) stosowane codziennie przez 3 dni do 5-dniowych hodowli ponownie ustanawiają indukowany przez glutaminian wzrost fosforylacji CREB w hodowlach APP / PS1 bez wpływu na fosforylację w hodowlach WT ( Figura 5, A i B). Ponadto, ani E64, ani BDA-410 nie wpływały na podstawowe poziomy pCREB w hodowlach WT lub APP / PS1 (dane nie pokazane). Czy zgodnie z tymi ustaleniami plastry APP / PS1 nie wykazały wzrostu pCREB wywołanego przez. rozerwanie, jak widać z przeciwciałem specyficznym wobec fosfoseryny 133 w zaróbkach i nietraktowanych odcinkach WT. To hamowanie było odwrócone w plasterkach od myszy, które były leczone E64 lub BDA-410, ale nie w stosunku do nośnika (Figura 5, C i D). Inhibitory nie wpływały na podstawową fosforylację CREB zarówno w plasterkach WT, jak i APP / PS1 (dane nie przedstawione). Łącznie dane te silnie wspierają możliwość, że inhibitory kalpainy działają poprzez przywrócenie wzrostu pCREB, ratując w ten sposób upośledzenie plastyczności synaptycznej spowodowane nadekspresją transgenów APP i PS1. Figura 5 Hamowanie cppain przywróciło wzrost fosforylacji CREB podczas plastyczności synaptycznej u myszy APP / PS1 i wytworzyło prawidłowy rozkład białka synaptycznego białka synapsyny I
[przypisy: problemy z tarczycą objawy, chirurgia plastyczna szczecin, sennik karmienie piersią ]
[podobne: womp zielona góra, medispirant opinie, receptory adrenergiczne ]