Hsp104 antagonizuje agregację a-synukleiny i zmniejsza degenerację dopaminergiczną w szczurzym modelu choroby Parkinsona ad 7

Dla każdego włókna, 100% montaż odzwierciedla nietraktowane włókna. Wartości reprezentują średnią. SD; n = 3. (C) EM włókien A30P inkubowanych bez lub z Hsp104 z ATP i systemem regeneracji jak w A. Pasek skali: 0,5 .m. (D i E) Włókna złożone z typu. -Syny typu dzikiego (0,5. M monomer) inkubowano przez godzinę w 37 ° C bez lub z podanymi kombinacjami Hsp104 (10. M), Hsp70 (10. M), Hsc70 (10. M), Hdj1 (10. M) lub Hdj2 (10. M) plus ATP i system regeneracji. Własność włókien określono metodą fluorescencji ThT (D) lub analizy sedymentacyjnej (E). Wartości reprezentują średnią. SD; n = 3. Hsp104 łączy się z ssaczymi chaperonami Hsp70 i Hsp40 w celu ułatwienia reaktywacji zdenaturowanych agregatów lucyferazowych (27, 40). W ten sposób przetestowaliśmy, czy ssacze szepty Hsp70 i Hsp40 mogą pomóc Hsp104 w demontażu włókien a-synów. W przeciwieństwie do samego Hsp104, Hsp70 i Hsc70 same lub w kombinacji z Hdj1 lub Hdj2 nie były zdolne do rozłożenia włókien y-synów w ramce czasowej testu (Figura 7, D i E). Hsp104 w połączeniu z Hsc70 i Hdj2 w celu promowania większego demontażu fibryny-than niż sam Hsp104, jak określono za pomocą fluorescencji ThT (Figura 7D) i analizy sedymentacji (Figura 7E). W mniejszym stopniu, Hsp104, Hsp70 i Hdj2 promowały więcej dezasemblacji a-synów niż sam Hsp104 (fig. 7, D i E), podczas gdy inne kombinacje były jednakowe (Hsp104, Hsp70 i Hdj1) lub nieco mniej (Hsp104, Hsc70). i Hdj1) skuteczne niż sam Hsp104 (fig. 7, D i E). Ogólnie, dane te wykazują, że Hsp104 antagonizuje różne konformacje a-syna występujące w czasie amyloidogenezy, oraz że ssaczy układ chaperonowy Hsp70 może wspomagać Hsp104 w demontażu włókien y-synów. Dyskusja Tutaj pokazujemy, za co uważamy, po raz pierwszy, że wzmocnienie systemu kontroli jakości białka ssaków za pomocą czynnika przebudowującego białko, którego nie spotyka się zwykle w metazoa, Hsp104, dramatycznie zmniejsza neurodegenerację dopaminergiczną i fosforylowane tworzenie grup y-sin u szczurów. lentiwirusowy model PD. Aby pomóc w zrozumieniu tych zdarzeń, wykorzystaliśmy czyste białka do analizy, w jaki sposób Hsp104 wpływa na. -Synylobutogenezę. Co istotne, Hsp104 bezpośrednio hamuje fibrylizację y -syny, jak również mutantów P-sprzężonych z P-synem A53T, A30P i E46K i mutantów fosforylujących serynę 129 S129A i S129E. Hsp104 hamował fibrylizację a-synów nawet, gdy (3-yyn był 400-krotnie bardziej obfity niż Hsp104. Sugeruje to, że Hsp104 specyficznie antagonizuje rzadki lub przejściowy konformer a -syny, być może specyficzny rodzaj oligomeryczny, który zarodkuje fibrylizację. -Syna. W rzeczywistości, Hsp104 zdemontował oczyszczone oligomery preamylotyczne A30P, które przyjęły toksyczną konformację powszechną dla wielu białek amyloidogennych (14). Takie oligomery (3-preryloidowe są toksyczne dla ludzkich komórek nerwiaka zarodkowego SH-SY5Y (14), co sugeruje, że Hsp104 eliminuje toksyczne konformery P-Ssy. Co najważniejsze, Hsp104 zdemontował wstępnie uformowane włókna a-sin. Specyficzne ssacze chaperony Hsp70 i Hsp40, w szczególności Hsc70 i Hdj2, zwiększyły demontaż fibryny a przez Hsp104. Zgodnie z naszą wiedzą pierwsza demonstracja skutecznego demontażu zarówno oligomerów P-senilu preamyloidalnego, jak i włókien amyloidowych (które są strukturami szczególnie stabilnymi) przez dowolne białko. Te różne działania remodelujące a-synzy wymagały wiązania ATP i hydrolizy przez Hsp104 i wyjaśnienia, w jaki sposób Hsp104 może zmniejszać neurodegenerację dopaminergiczną i fosforylowane tworzenie grup włączających y-synie na arenie mózgu szczura. W dwóch poprzednich badaniach potwierdzono, że Hsp104 może dysocjować włókna a-synowskie, ale nie przeprowadzono eksperymentów z oligomerami P-senilu (42,52). Jednak w zastosowanych warunkach, Hsp104 zmniejszał fluorescencję ThT wstępnie uformowanych włókien a-sin jedynie o 5% . 20% po 24 godzinach inkubacji (51, 52). Ten niski poziom potencjalnego dezasemblacji włókien nie został potwierdzony innymi metodami (51, 52). Co godne uwagi, przedstawiono dowody na to, że Hsp104 degradował a -syny (51). Jest to wyjątkowo mało prawdopodobne, biorąc pod uwagę, że Hsp104 nie ma motywów proteazy ani aktywności proteazowej (27, 29, 30, 31, 53, 54). Bardziej prawdopodobne jest, że wyniki Kong et al. są spowodowane zanieczyszczającą proteazą (51, 52). W przeciwieństwie do tego, nie znajdujemy absolutnie żadnych dowodów na degradację. -Syny przez Hsp104 (Figura 6C). Zamiast tego Hsp104 szybko rozkłada włókna a-sin i oligomery preamyloidowe z wytworzeniem rozpuszczalnego a -syny. Nie jest jasne, dlaczego Hsp104 został utracony z metazoa (28). W istocie nie jest jasne, czy komórki ssaków wyrażają analogiczną dezagregagenę białkową zdolną do rozpuszczania dużych agregatów białkowych i przywracania funkcji białka.
[patrz też: piramida żywieniowa dla dzieci, brzoskwinie wartości odżywcze, kawa rozpuszczalna skład ]
[więcej w: kawa rozpuszczalna skład, ciekawe aplikacje na telefon, przychodnia władysławowo ]