Hsp104 antagonizuje agregację a-synukleiny i zmniejsza degenerację dopaminergiczną w szczurzym modelu choroby Parkinsona czesc 4

Ocenę ilościową gęstości włókien TH-IR przeprowadzono w prążkowiu. Zgodnie z neuroprotekcyjnym działaniem Hsp104 na poziomie komórkowym, ekspresja Hsp104 znacząco zmniejszyła utratę terminacji nerwów z 21,6% (A30P / YFP) do 7% (A30P / Hsp104) (P <0,05; n = 7) (Figura 2B) . Następnie użyliśmy barwienia srebrem jako markera dla degenerujących się neuronów u zwierząt wykazujących ekspresję A30P / YFP lub A30P / Hsp104 (42, 47, 48). Nie zaobserwowano barwienia srebrem w niestrzyżonej istocie czarnej (fig. 3, A i D). W przeciwieństwie do tego, rozproszone neurony zawierające srebrne pozytywne struktury ciemne zaobserwowano u zwierząt, którym wstrzyknięto Lenti-A30P / lenti-YFP, zgodnie z degeneracją indukowaną P-syniną (18, 42) (Figura 3B). Wyższe powiększenia wykazały, że zwierzęta wykazujące ekspresję A30P / YFP obficie gromadziły złogi ziarniste w ciałach komórkowych i aksonach na poziomie istoty czarnej (fig. 3, E i G) (42). Obserwowano również wyraźną patologię neurytyczną (wykres 3G). Przeciwnie, koekspresja Hsp104 znacznie zmniejszyła pojawienie się neuronów degenerujących srebro i ziarnistych depozytów srebra (Figura 3, C i F), co wskazuje, że Hsp104 antagonizuje neurodegenerację wywołaną przez A30Py-Ssyna. W grupie A30P / Hsp104 nadal obserwowano tylko kilka rzadkich, srebrnych neuronów pozytywnych. Chociaż obserwacje te były konsekwentnie obserwowane u zwierząt eksprymujących Hsp104, wysoka zmienność w stosunku sygnału do szumu obserwowana w przypadku barwienia srebrem w sekcjach, nawet w obrębie tego samego zwierzęcia, zapobiega kwantyfikacji. Figura 3Hsp104 zapobiega neurodegeneracji wywołanej A30Py-Scyd. (A. G) Degenerujące neurony nigral wykryto przez barwienie srebrem. (A i D) Boki bez iniekcji nie wykazywały żadnego specyficznego barwienia srebrem. (D. G) Wyższe powiększenie ujawnia liczne srebrne pozytywne ciemne struktury w istocie czarnej zwierząt ekspresjonujących A30P / YFP (E). (G) Obfitość patologii neurologicznej wyraźnie wykazała obecność degenerujących się neurytów. (C i F) Koekspresja Hsp104 z A30Py-syn uniemożliwia pojawienie się neuronów degenerujących o dodatniej zawartości srebra. Pasek skali: 300 .m (A4); 100 m (D. G). Hsp104 zmniejsza tworzenie fosforylowanych wtrąceń. Aby zrozumieć mechanizm, za pomocą którego Hsp104 zapobiega indukowanemu przez. -Syn. Neurodegenerację, badaliśmy, w jaki sposób Hsp104 wpływa na agregację. -Syny in vivo. Dwa różne Abs zastosowano do wykrywania. -Syny u zwierząt wyrażających A30P / YFP lub A30P / Hsp104 (Figura 4). Syn Ab RG rozpoznaje zarówno szczurzy, jak i ludzki. -Syna metodą western blot (42). Jednak ten Ab wykrywa jedynie nadekspresję a-synów, a nie endogennych poziomów tego białka w mózgu szczura (42). Przeprowadzono także barwienie z LB509, Ab, który jest specyficzny dla ludzkiego. -Syny (Figura 4, D. I). Silną akumulację ludzkiego a -syny zarówno w perykariach jak i neurytach obserwowano w istocie czarnej zwierząt ekspresjonujących A30P / YFP (Figura 4, B i E) lub A30P / Hsp104 (Figura 4, C i F) w porównaniu z zwierzęta bez iniekcji (Figura 4, A, D i G). Badanie przy większym powiększeniu ilustruje trudność w rozróżnianiu pomiędzy agregatami a-sen i akumulacją subkomórkową tego białka (Figura 4, H i I). Wysokie poziomy rozpuszczalnego a -syny mogą maskować wygląd agregatów i utrudniać oznaczanie ilościowe. Jednak w niektórych neuronach gęste puncta były często obserwowane w neurytach, a były one mniej widoczne u zwierząt eksprymujących Hsp104. Ponadto, bardziej gęste zabarwienie wewnątrz perykariów a-synów o aktywności dodatniej wskazuje na obecność agregatów a-sin (Figura 4, H i I). Hsp104 znacząco zmniejsza odsetek neuronów a-dodatnich posiadających gęste struktury w ciałach komórkowych lub aksonach (54,8%. 5,5% i 30,8%. 4,4% odpowiednio dla A30P / YFP i A30P / Hsp104, średnia. SEM; P <0,05; ; n = 7). Co ciekawe, u zwierząt eksprymujących Hsp104, wykryliśmy bardziej rozproszoną i homogenną lokalizację w pozycji a-synów wzdłuż neuropilu, co wskazuje, że Hsp104 antagonizuje gęste struktury lub agregaty i pomaga w utrzymaniu rozpuszczalnych form a -syny. Te dane sugerują, że Hsp104 może antagonizować (3-agregację in vivo. Figura 4Hsp104 zmniejsza liczbę fosforylowanych inkluzją a -syny. (A (C) Wytworzono silną ekspresję ludzkiej y -syny za pomocą zarówno RG syn, jak i (Dł +) ludzkiego specyficznego LB509. (G. I) Wyższe powiększenie ujawniło akumulację i agregację ludzkiego. -Syna zarówno w ciałach komórek (strzałki) i neurytach (groty strzałek). (H i I) Zauważ, że jest mniej gęsta puncta w neurytach w stanie A30P / Hsp104. (J) Sekcje istoty czarnej od strony bez iniekcji i (K) od szczurów eksprymujących A30P / YFP lub (L) A30P / Hsp104 były wybarwione immunologicznie specyficznym Ab dla fosforylowanego Ser 129. -Syny [patrz też: sennik karmienie piersią, licówki porcelanowe cennik, brzoskwinie wartości odżywcze ] [przypisy: chrypka icd 10, trittico ulotka, medicor rzeszow ]