Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy ad 7

To odkrycie jest potwierdzone przez traktowanie komórek BLL CLL Dex, CsA i EGCG, które silnie obniżają podstawową aktywność Lyn i zwiększoną apoptozę komórek białaczkowych, co sugeruje, że apoptotyczny efekt tych leków jest mediowany przez obniżenie poziomu Lyn. Nasza hipoteza jest również zgodna z innymi doniesieniami wykazującymi, że aktywacja Lyn w liniach komórek krwiotwórczych (45. 47) lub aktywna nadmierna ekspresja Lyn w komórkach nabłonkowych odgrywa kluczową rolę w zapobieganiu apoptozie komórek (48). Odpowiednio, 3-krotny wzrost apoptotycznych komórek pre-B obserwowano u myszy z niedoborem ekspresji kinaz Src Lyn, Fyn i Blk w porównaniu z myszami typu dzikiego (49). Dane te mogą mieć znaczenie kliniczne, ponieważ identyfikują kinazę Src Lyn jako potencjalny cel dla leków zdolnych do indukowania apoptozy w komórkach białaczkowych B-CLL. Continue reading „Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy ad 7”

Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy ad 6

Po pierwsze, immunolokalizacja błony komórkowej komórek białaczkowych okazała się bardziej intensywna i koalescencyjna, zgodna z innym rozkładem Lyn przez poddomeny błony; mając na uwadze, że Lyn był skoncentrowany w membranach lipidowych lipidów w prawidłowych komórkach B, enzym był obecny na całej powierzchni błony komórkowej w komórkach białaczkowych. Po drugie, kinazę tyrozynową wykryto również w cytozolu złośliwych limfocytów B. Uwalnianie Lyn do cytozolu po odciąganiu zależnym od kaspazy kinazy tyrozynowej na jego N-końcu zostało opisane jako ogólny mechanizm w komórkach krwiotwórczych podczas apoptozy indukowanej BCR (40). W przeciwieństwie do tego, cytosoliczna lokalizacja Lyn w niestymulowanych komórkach jest właściwością unikalną dla świeżo wyizolowanych złośliwych limfocytów B-CLL. Nasze analizy wykazały, że obie izoformy Lyn znajdowały się w rozpuszczalnej frakcji komórek białaczkowych. Continue reading „Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy ad 6”

Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy ad 5

Wartości IC50 dla PP2, SU6656, EGCG, CsA i Dex wynosiły odpowiednio 10 | j, 7,5 | jM, 10 | jM, 7 | jM i 10 | jM. Gdy komórki białaczkowe hodowano w obecności CsA lub Dex, zaobserwowano wyraźny wzrost apoptozy w porównaniu z komórkami hodowanymi w samej pożywce, co wykazano przez barwienie aneksyną V ( Figura 6) i analiza aktywacji kaspazy (Figura 7A). Co ciekawe, apoptoza komórek białaczkowych korelowała z dużym spadkiem zarówno aktywności podstawowej, jak i ilości Lyn (Figura 7B). Ekspozycja komórek białaczkowych na PP2 i SU6656 powodowała zarówno oczekiwane hamowanie nadeksprymowanej aktywności Lyn (Figura 7B), jak i wyraźną apoptozę komórek (Figury 6 i 7A). Aby potwierdzić swoisty udział Lyn w apoptozie komórkowej, przeprowadziliśmy eksperymenty kontrolne przy użyciu PP3, nieaktywnego analogu PP2. Continue reading „Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy ad 5”

Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy czesc 4

Dane reprezentują 3 oddzielne eksperymenty. Aby potwierdzić obecność aktywowanej konformacji Lyn w świeżo przygotowanych komórkach BLL CLL, przeanalizowaliśmy reakcję enzymu na zaangażowanie BCR po ligacji IgM u 15 pacjentów. Figura 4B pokazuje aktywność Lyn wykrytą po ligacji BCR limfocytów B uzyskanych od normalnego osobnika i 2 pacjentów z CLL, typowego pacjenta (CLL nr 18) wyrażającego niskie poziomy IgM i nietypowego przypadku (CLL nr 29) wyrażającego wysokie IgM poziomy. Podczas gdy ligacja IgM wyzwoliła, zgodnie z oczekiwaniami, znaczną aktywację Lyn (9,2-krotnie) w prawidłowych komórkach B, zaobserwowano słaby wzrost aktywności kinazy tyrozynowej w komórkach białaczkowych od obu pacjentów w odniesieniu do wartości wyjściowej. Ponieważ IgM było silnie eksprymowane w normalnych limfocytach B, jak również w komórkach białaczkowych od pacjenta CLL nr. Continue reading „Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy czesc 4”

Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy cd

Ponieważ Lyn jest członkiem rodziny Src, która jest głównie eksprymowana w limfocytach B i jest jedną z pierwszych cząsteczek uczestniczących w transdukcji sygnałów z BCR, ocenialiśmy ilość białka Lyn obecnego w białaczce Komórki B odzyskane od pacjentów z CLL w odniesieniu do normalnych limfocytów B. W porównaniu z limfocytami B kontrolnymi, wszystkie 40 analizowanych próbek B-CLL eksprymowało większe ilości izoform zarówno p53, jak i p56 (Figura 3A). Analiza densytometryczna zawartości białka Lyn wykazała nadekspresję B-CLL w zakresie od 2,5 do 5 razy większą niż ilość obserwowana w prawidłowych komórkach B. W przeciwieństwie do tego, analiza Western blot Src, Fyn, c-Fgr i Lck wykazała, że ilości białek komórkowych tych kinaz Src były podobne w komórkach prawidłowych i białaczkowych (Figura 3A). Figura 3 Ekspresja białek kinazy Src i mRNA Lyn w prawidłowych i CLL komórkach B. Continue reading „Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy cd”

Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy ad

Podczas gdy ilość i aktywność Lyn są zmniejszane przez leki, które indukują apoptozę w hodowanych komórkach BLL, inhibitory Lyn znacznie zmniejszają przeżycie komórek białaczkowych. Wyniki Fosforylacja białka tyrozyny jest nieprawidłowa w B-CLL. Komórkowa białkowa fosforylacja tyrozyny komórek B jest przedstawiona na Fig. 1. Normalne limfocyty B, stosowane jako kontrole, wykazały bardzo niską fosforylację tyrozyny, podczas gdy świeżo wyizolowane komórki białaczkowe z 40 analizowanych pacjentów wykazywały nienormalnie wysokie barwienie immunologiczne dla fosforylowanej tyrozyny. Continue reading „Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy ad”

Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy

Przewlekła białaczka limfocytowa z komórek B (B-CLL) jest chorobą nowotworową charakteryzującą się akumulacją limfocytów B z powodu niekontrolowanego wzrostu i odporności na apoptozę. Analiza komórek B świeżo izolowanych od 40 pacjentów z przewlekłą białaczką limfocytową wykazała, że kinaza Src Lyn, cząsteczka przełączająca, która łączy receptor komórki B z sygnalizacją w dół, wykazuje anomalne właściwości. Lyn wykazuje niezwykłą nadekspresję na poziomie białka w komórkach białaczkowych w porównaniu z normalnymi limfocytami B, z istotną podwielokrotnością kinazy anomalnie obecną w cytozolu. Podczas gdy w prawidłowych limfocytach B aktywacja Lyn jest zależna od stymulacji receptora limfocytów B, w spoczynkowych komórkach złośliwych, konstytutywna aktywność kinazy odpowiada za fosforylację tyrozyny o wysokim poziomie podstawowym i niską reakcję na ligację IgM. Dodanie inhibitorów Lyn PP2 i SU6656 do białkowych hodowli komórkowych przywraca apoptozę komórek, a leczenie złośliwych komórek lekami indukującymi apoptozę komórek zmniejsza zarówno aktywność, jak i ilość kinazy tyrozynowej. Continue reading „Przewlekłe limfocyty białaczkowe limfocyty B zawierają anormalną kinazę tyrozynową Lyn, przypuszczalnie przyczyniającą się do wadliwej apoptozy”

Hsp104 antagonizuje agregację a-synukleiny i zmniejsza degenerację dopaminergiczną w szczurzym modelu choroby Parkinsona ad 10

Liczenie prowadzono do momentu zniknięcia pars reticulata, co wykluczało jądro zrogowłosenia. Sekcje użyte do kwantyfikacji obejmowały całą substancję czarną od wierzchołka wierzchołka pars compacta z powrotem do ogonowego końca pars reticulata. Co istotne, nie zaobserwowano znaczącej różnicy w szacowanej objętości istoty czarnej przy użyciu zasady Cavalieri lub wielkości ciałek komórkowych zliczonych neuronów w obrębie grup eksperymentalnych (strona bez iniekcji w porównaniu z wtłaczaną) lub między grupami eksperymentalnymi. Aby określić gęstość terminali TH-IR, włókna prążkowia wybarwiono na TH za pomocą zestawu ABC (Vector Laboratories), a odpowiednie gęstości optyczne oszacowano za pomocą oprogramowania NIH IMAGE 1.4 (http://rsbweb.nih.gov/nih- image /) (18, 42). W przypadku liczby neuronów zawierających fosforylowane inkluzje a -syny, 5 sekcji w istocie czarnej barwiono za pomocą Pser129 Ab metodą kompleksu awidyna-biotyna. Continue reading „Hsp104 antagonizuje agregację a-synukleiny i zmniejsza degenerację dopaminergiczną w szczurzym modelu choroby Parkinsona ad 10”

Hsp104 antagonizuje agregację a-synukleiny i zmniejsza degenerację dopaminergiczną w szczurzym modelu choroby Parkinsona ad 9

Zdolność Hsp104 do zapobiegania i odwrotnej agregacji białek patogennych należy uznać za potencjalną strategię leczenia lub odwracania chorób PD i innych agregacji białek. Jednak dalsze badania są wymagane do oceny bezpieczeństwa długotrwałej ekspresji Hsp104 w neuronach. Metody Wektory lentiwirusowe. cDNA kodujący YFP zlokalizowany w jądrach (BD Biosciences. Clontech), ludzki P-syn A30P i Hsp104 (należycie dostarczone przez D. Continue reading „Hsp104 antagonizuje agregację a-synukleiny i zmniejsza degenerację dopaminergiczną w szczurzym modelu choroby Parkinsona ad 9”

Hsp104 antagonizuje agregację a-synukleiny i zmniejsza degenerację dopaminergiczną w szczurzym modelu choroby Parkinsona ad 8

Początkowe próby wyodrębnienia takiej działalności zakończyły się niepowodzeniem. Metazoa maszyny kontroli jakości mogą być bardziej zoptymalizowane, aby zapobiec agregacji białka niż odwrócić go i opiera się bardziej na systemie opiekuńczym Hsp70. System ten silnie hamuje agregację białka, ale ma tylko ograniczoną zdolność do rozwiązywania nawet niewielkich rozpuszczalnych agregatów białkowych (27). Mimo to, komórki ssaków mają mechanizmy do oczyszczania agregatów białka, jak ujawniono przez wyciszanie genu kodującego zagregowane białko (55). Jednak te szlaki odzwierciedlają raczej autofagię i inne szlaki degradacji białka niż reaktywację białka (23, 56). Continue reading „Hsp104 antagonizuje agregację a-synukleiny i zmniejsza degenerację dopaminergiczną w szczurzym modelu choroby Parkinsona ad 8”