Przeszczepienie komórek macierzystych nerki może poprawić fenotyp mysiego modelu rdzeniowego zaniku mięśni ad

W rzeczywistości, mogą one różnicować się do neuronów ruchowych, gdy są hodowane w obecności kwasu retinowego (RA) z dźwiękowym jeżem (Shh), po okresie. Primingu. w hodowli ze specyficznymi czynnikami wzrostu (8, 9) (rysunek 1). Ryc. Komórki DALSHSSSSC mogą różnicować się do neuronów ruchowych in vitro. Po różnicowaniu in vitro, komórki ALDHhiSSClo pochodzące od transgenicznych myszy HB9-GFP, które eksprymują białko GFP (zielone) tylko w neuronach ruchowych, dają neurony o złożonej morfologii (A i B), wykazujące fenotyp neuronalny i ruchowo-nerwowy potwierdzony przez ekspresję neuronów. marker TuJ1 (C, D i połączony obraz w E), ChAT (połączone obrazy dla HB9-GFP i ChAT; F i G) i wysepka-1 (H i I, scalanie). Jądra są barwione DAPI. Pręty skali: 70 m (A); 50 m (B i F. I); 100 (m (C = E). Po zaindeksowaniu komórek w hodowli przez 5 dni (8, 9), wszczepiono 20 000 komórek ALDHhiSSClo myszom SMA w dniu (P1). Stężenie komórek i protokół transplantacji ustalono na podstawie wcześniejszych wyników uzyskanych przez przeszczepienie ALDHhiSSClo myszom nmd (9). Nieleczeni transgeniczni mioty SMA leczonych myszy, którzy otrzymali tylko nośnik i Smn + / + SMN2 + / + SMNy7 + / + (typu dzikiego dla locus SMN, określani tutaj jako myszy WT) zastosowano jako kontrole. Badanie zostało zaprojektowane w taki sposób, aby rodzeństwo było równomiernie rozmieszczone w grupach leczonych i kontrolnych i było równo podzielone między mężczyzn i kobiety. Aby zidentyfikować i monitorować bezpośrednio neurony ruchowe pochodzące z komórek ALDHhiSSClo, użyliśmy transgenicznych myszy eksprymujących GFP pod kontrolą promotora HB9 w neuronach ruchowych (10) jako dawców komórek, umożliwiając w ten sposób identyfikację wszczepionych neuronów ruchowych w rdzeniu głównym gospodarza (Figura 2). Figury Komórki 2ALDHhiSSClo wszczepiają się w brzuszne rogi myszy SMA. (A) Poprzeczne odcinki lędźwiowego rdzenia kręgowego, pokazujące przeszczepione NSC HB9-GFP po dooponowym wstrzyknięciu myszy P1. Komórki ALDHhiSSClo różnicują się w komórki przypominające neurony ruchowe, które eksprymują transgen HB9-GFP. (B i C) Obrazy o wyższym powiększeniu (odpowiednio sekcje dolnego-lewego i prawego-dołu A) pochodzących od dawcy komórek podobnych do neuronu motoneuronu HB9-GFP zlokalizowanych w rogach przednich. Pasek skali: 200 (m (A); 75 m (B i C). Gdy NSC ALDHhiSSClo przeszczepiono myszom SMA, fizyczny wygląd myszy SMA polepszył się w porównaniu z nieleczonymi, dopasowanymi wiekiem myszami SMA (Figura 3A). Leczone myszy SMA wykazały znacznie lepsze przeżycie w porównaniu z nieleczonymi myszami (test log-rank; P 2 = 47,97, P <0,00001, Figura 3B). Średnie przeżycie wzrosło z 13,04. 1,73 dni u myszy nieleczonych (n = 24) do 18,16. 1,78 dnia u leczonych myszy (n = 24). Przetrwanie przedłużono o 5,12 dnia, co stanowiło wzrost o 39,26% w całym okresie życia. Maksymalny czas przeżycia wynosił 21 dni u leczonych i 16 dni u nieleczonych myszy. Figura 3B przedstawia krzywe przeżycia Kaplan-Meier dla tych myszy. Nie zaobserwowano statystycznie istotnej różnicy w przeżyciu pomiędzy samcami i samicami (dane nie przedstawione). Figura 3 Przeszczepianie NNS przedłuża przeżycie, łagodzi utratę wagi i polepsza zachowanie motoryczne myszy SMA. Myszy SMA traktowano dooponowo iniekcjami komórek macierzystych ALDHhiSSClo lub zaróbką w dniu P1. (A) Fotografie przedstawiające ogólny wygląd myszy SMA leczonych NSC (SMA Tr), myszy nieleczonej SMA (SMA) i myszy WT. Myszy leczone SMA były większe niż myszy nieleczone. (B) Krzywe przeżywalności Kaplan-Meier dla myszy SMA traktowanych P-primerem. NSC (SMA Tr), niezróżnicowane komórki ALDHhiSSClo (SMA NSC), astrocyty pochodzące od ALDHhiSSClo (SMA Astro) i pierwotne fibroblasty (SMA Fibro) lub myszy nieleczone (SMA; n = 24 dla każdej grupy). Przeżywalność znacznie wzrosła w przypadku myszy z przeszczepionymi NSC w porównaniu z niezróżnicowanymi NSC (P = 0,002, test log-rank); astrocyty i fibroblasty (P <0,00001); lub pojazd (P <0,00001, test log-rank). (C) Krzywe masy myszy leczonych SMA ALDHhiSSClo (n = 24) lub nieleczonych (n = 24) i nietkniętych kontrolnych WT z miotu W (n = 24). Wszystkie wykresy pokazują średnie wagi każdego dnia, z kreskami błędów odpowiadającymi SD. Leczone myszy SMA wykazywały zwiększoną szybkość wzrostu w stosunku do nieleczonych myszy SMA (10-13 dni, P <0,00001). (D) Czas chwytania u traktowanych myszy SMA (n = 24) lub nieleczonych SMA (n = 24) i nietkniętych kontrolnych WT z miotu W (n = 24). Czas chwytania był statystycznie różny u nieleczonych i leczonych myszy SMA (P <0,00001) w wieku 12-13 dni. Paski błędów przedstawiają SD. Ocenialiśmy także krzywą przeżycia myszy SMA przeszczepionych niezróżnicowanymi komórkami ALDHhiSSClo, astrocytami pochodzącymi od ALDHhiSSClo i mysimi pierwotnymi fibroblastami (Figura 3B). [hasła pokrewne: brzoskwinie wartości odżywcze, balsam szostakowskiego zastosowanie, licówki porcelanowe cennik ] [patrz też: lendacin, medispirant żel pod prysznic opinie, femoston mini ]