Przeszczepienie komórek macierzystych nerki może poprawić fenotyp mysiego modelu rdzeniowego zaniku mięśni cd

Myszy SMA z przeszczepionymi NSD ALDHhiSSClo przeżyły dłużej niż myszy szczepione niezróżnicowanymi komórkami ALDHhiSSClo, z astrocytami ALDHhiSSClo lub z pierwotnymi fibroblastami. Żywotność myszy SMA z przeszczepionymi niezróżnicowanymi NSC ALDHhiSSClo, chociaż krótsza niż obserwowana u myszy otrzymujących komórki z primerem, była dłuższa niż myszy otrzymujących astrocyty i fibroblasty (16,92. 1,89 dni, n = 24, zagnieżdżone w porównaniu do niezróżnicowanych, log-rank test, P 2 = 5,39, P = 0,002, niezróżnicowany w porównaniu do astrocytów, test logarytmiczny, P 2 = 13,6, P = 0,00023, niezróżnicowany w porównaniu do fibroblastów, <2 = 28,01, P <0,00001). Zwierzęta szczepione astrocytami pochodzącymi z NSD ALDHhiSSClo przeżyły dłużej niż te otrzymujące pierwotne fibroblasty; krzywa przeżycia dla tej ostatniej grupy kontrolnej nie różniła się od tej dla nieleczonych myszy (astrocyty: 14,67. 1,88, n = 24, primed versus astrocytes, test log-rank, P2 = 26,04, P <0,00001, astrocyty względem fibroblastów, log test porównawczy,> 2 = 4,72, P = 0,003, fibroblasty: 13,33 . 1,9, n = 24, primed w stosunku do fibroblastów, test log-rank, <2 = 41,97, p <0,00001, fibroblasty w porównaniu do myszy leczonych podłożem, logi- test rangowy, <2 = 0,76, P = 0,38). Jednym z pierwszych objawów klinicznych choroby jest zmniejszenie masy ciała. Nietraktowane myszy SMA wykazywały istotne różnice w wadze w 5 dniu życia w porównaniu z myszami WT (2,21. 0,18 g wobec 3,62. 0,42 g, ANOVA / Tukey; P <0,00001; n = 24 na grupę; Figura 3C). Różnica w wielkości między nieleczonymi myszami SMA i współmałżonkami WT pozostawała widoczna przez całe życie. Traktowane myszy wykazywały większy wzrost masy ciała w porównaniu z nieleczonymi myszami SMA. Krzywa wzrostu była znacząco różna w wieku 10 13 13 dni (ANOVA / Tukey; P <0,00001) (Figura 3C). Ocena nerwowo-mięśniowa przeszczepionych zwierząt. Nieleczone myszy SMA wykazywały zaburzenia nerwowo-mięśniowe w 5 dniu życia, w szczególności podczas prostowania się, gdy były umieszczone na plecach. W następnym tygodniu życia słabość ta stopniowo się pogarszała. W wieku 13 dni wykazywali poważne trudności w chodzeniu, z częstymi upadkami. Stojąc na wszystkich 4 kończynach, wykazywali drżenie w tylnych kończynach. Natomiast w wieku 13 dni leczone zwierzęta wykazywały płynność ruchu i bezpieczeństwo chodu (Supplemental Videos 1. 3). Aby ocenić, czy transplantacja NSC może zapewnić poprawę czynności, przetestowaliśmy myszy leczone i kontrolne w teście chwytania i testach otwartego pola. Testy te zostały wcześniej użyte do oceny nerwowo-mięśniowej myszy SMA w tym samym wieku (11). W teście chwytania średni czas, w którym myszy kontrolne mogły wspierać swoją wagę siłą przedramienia, zwiększał się regularnie i proporcjonalnie wraz z wiekiem (Figura 3D). W wieku 12 dni myszy WT chwyciły metalową szynę przez 10 sekund, ale nieleczone myszy SMA nie były w stanie się uchwycić. Odwrotnie, leczone myszy udało się uchwycić przez 3 sekundy. W 13 dniu myszy traktowane myszy wykazywały stabilne wyniki w teście chwytania (dodatkowa Figura 2), a czas chwytania myszy WT wzrósł do 15 sekund (po 13 dniach, w porównaniu z nieleczonymi, ANOVA / Tukey; P <0,00001; ). Obserwacja spontanicznej aktywności myszy w otwartym polu reprezentowała drugą metodę oceny funkcjonalnej (dodatkowa figura 2). W wieku 13 dni, nieleczone myszy SMA wykazały poważnie upośledzoną aktywność lokomotoryczną i zachowania eksploracyjne, z zaburzonymi odpowiedziami w zakresie prostowania powierzchni. Myszy leczone SMA wykazywały zmniejszoną liczbę krzyżówek w porównaniu z WT (myszy traktowane wobec myszy WT, ANOVA / Tukey; P <0,00001), ale utrzymywały aktywność lokomotoryczną i wykazywały pewne zachowanie eksploracyjne, na co wskazywała liczba skrzyżowań (myszy traktowane versus nietraktowane, ANOVA / Tukey; P <0,00001). ALDHhiSSClo NSC są szeroko dostępne i mogą generować neurony i neurony ruchowe w miąższu SMA. Aby zbadać potencjalne mechanizmy pośredniczące w korzystnym wpływie transplantacji NSC, najpierw zbadaliśmy, czy NSC ALDHhiSSClo mogą przyczynić się poprzez zastąpienie endogennych dysfunkcyjnych zmutowanych komórek wystarczającą liczbą komórek typu dzikiego. Aby odpowiedzieć na to pytanie, zbadaliśmy rozkład wszczepiania komórek dawcy w miąższu i ich losy różnicowania w rdzeniu kręgowym SMA. Analizę migracji komórek opisano w Dodatkowych metodach i uzupełniającej figurze 3. W końcowym stadium choroby wykryliśmy neurony ruchowe pochodzące z przeszczepu (HB9-GFPa-dodatni) w szarej masie biorcy rdzenia kręgowego (Figura 4A). GFP-dodatnie komórki obserwowano zarówno w powiększeniu szyjki jak i lędźwi, co wskazuje, że NSC mogą odpowiednio nabrać neuronalny los po migracji do miąższu. Fig. 4 Komórki ALDHhiSSClo przeszczepione myszom SMA różnicują się w neurony ruchowe in vivo. Komórki ALDHhiSSClo pochodzące od myszy HB9-GFP, które eksprymują GFP tylko w neuronach ruchowych, zostały przeszczepione dooponowo [podobne: problemy z tarczycą objawy, hydrominum skutki uboczne, chirurgia plastyczna szczecin ] [patrz też: wkładka jaydess, tonaxinum forte na noc, czopki eva qu ]