Przeszczepienie komórek macierzystych nerki może poprawić fenotyp mysiego modelu rdzeniowego zaniku mięśni czesc 4

Neurony GFP + wykryto w przednim rogu rdzenia kręgowego, jak pokazano w przekrojach wieńcowych rdzenia kręgowego (A, rdzeń kręgowy szyjny, B, rdzeń kręgowy lędźwiowy). Immunohistochemia markerów neuroektodermalnych potwierdza, że komórki te są zróżnicowane na neurony. Mikroskopia konfokalna wykazała, że neurony pochodzące od dawcy GFP + współeksprymują białka swoiste dla neuronu, takie jak NeuN (C) i MAP2 (D). Komórki GFP + wykazują właściwości motoryczno-neuronowe, co wykazano przez dwukrotne barwienie immunofluorescencyjne GFP (zielone) pod wpływem promotora motoneuronalnego specyficznego dla HB9 i neuroprzekaźnika cholinergicznego (E, GFP; F, ChAT; G, łączenie). (H. J) Aksony HB9-GFP (sygnał zielony, H) są wykrywane w przeszczepionych korzeniach brzusznych SMA, znakowanych NF (sygnał czerwony, I), myszy SMA po przeszczepie (J, łączenie). Pasek skali: 250 .m (A i B); 75 (m (C i D); 100 (m (ECH); 50 m (H. J). Wykryty GFP-pozytywny neuron ruchowy pochodzący od dawcy wydawał się morfologicznie podobny do neuronów ruchowych gospodarza, choć z mniejszymi wymiarami, czego można się było spodziewać w nowo wytworzonych komórkach. Barwienie przeciwciałem GFP odróżniało je od pozostałych neuronów ruchowych gospodarza, a pochodzące z GFP komórki pochodzące od ALDHhiSSClo wydłużały długie procesy poziomo do istoty szarej. Nieobciążona stereologiczna kwantyfikacja za pomocą optycznych dyktatorów i losowych próbek wykazała, że liczba komórek HB9-GFP-dodatnich wynosiła 323. 25 komórek na rdzeń kręgowy. Przeprowadziliśmy także analizę FISH dla chromosomu Y w eksperymentach z niedopasowanymi płciowo przeszczepami (komórki męskie do biorców płci żeńskiej). Nieobciążona stereologiczna kwantyfikacja za pomocą optycznych dyktatorów i losowe pobieranie próbek FISH wykazała, że 2,367. W miąższu rdzenia kręgowego obecnych było 205 męskich komórek dawcy. Aby całkowicie ocenić fenotyp nabytych przez przeszczepione komórki, przeprowadziliśmy konfokalną analizę immunohistochemiczną dla antygenów neuroektodermalnych połączoną z analizą FISH dla chromosomu Y (dodatkowe rysunki 4 i 5). Przeszczepione komórki różniły się głównie na neurony, co wykazano przez dwukrotne pozytywne barwienie dla białka 2 związanego z mikrotubulą specyficznego dla neuronu (MAP2) i chromosomu Y (41,5%> 4,7%). Analiza immunohistochemiczna dla antygenów glejowych (białko kwaśne włókniste glejowe [GFAP] i O4), w połączeniu z analizą FISH dla chromosomu Y, wykazała obecność 27,6%. 5,6% astrocytów i 3,1%. 1,1% oligodendrocytów we wszystkich komórkach męskich dawcy. Ponadto 25,4%. 4,5% komórek wykazywało charakterystykę NSC / komórek progenitorowych, wyrażając zarówno nestynę, jak i chromosom Y. Aby potwierdzić tożsamość neuronalną komórek GFP-dodatnich, wykorzystaliśmy analizę immunohistochemiczną dla markerów neuronowych, a następnie mikroskopię konfokalną na odcinkach rdzenia kręgowego przeszczepionych zwierząt. Komórki ALDHhiSSClo GFP-pozytywne znajdujące się w istocie szarej rdzenia kręgowego były immunoreaktywne dla szeregu antygenów specyficznych dla neuronu, w tym neurofilamentu (NF), MAP2 i antygenu specyficznego dla neuronu jądrowego (NeuN) (Figura 4). Kompletna ocena fenotypu nabytego przez przeszczepione komórki jest opisana w Suplementowych Metodach i Suplementowej Figurze 4. Markery komórek odpornościowych krwi (limfocyty i komórki NK) lub aktywowane mikrogleje nie zidentyfikowały żadnych objawów immunoreakcji przeszczepu (dane nie pokazane). Aby rozwiązać problem wymiany neuronów ruchowych przez komórki dawcy, przetestowaliśmy, aby zobaczyć, czy przeszczepione komórki wykazują fenotyp motoneuronowy, oceniając ekspresję acetylotransferazy choliny (ChAT) i HB9. Komórki te przypominają morfologicznie prawdziwe neurony ruchowe i są pozytywne zarówno dla ChAT, jak i HB9 (Figura 4, E. G). Według stereologicznej oceny opartej na immunoreaktywności ChAT i GFP, pozycji w obrębie rogów przednich i wymiaru komórki (> 25 mm), oszacowaliśmy, że neurony dawcy stanowią 3,5% wszystkich neuronów neuronów ChAT. Komórki pochodzące z HB9-GFPa wydłużały swoje aksony poziomo do istoty białej, a niektóre komórki również rozszerzały procesy do korzeni brzusznych (średnia 27. 11 aksonów dodatnich dla GFP na zwierzę), co sugeruje, że mogą wydłużać swoje aksony w kierunku obwodu (Figura 4, H. J). Długość aksonów HB9-GFP została oszacowana na odległość 2. 3 mm w stosunku do wejścia korzenia do rdzenia kręgowego. Biorąc pod uwagę małą liczbę neuronów ruchowych dawców i ich ograniczone wydłużenie aksonalne, doszliśmy do wniosku, że wymiana neuronów nie jest głównym mechanizmem korzystnego działania NSC; w związku z tym zbadaliśmy kolejne potencjalne mechanizmy. Przeszczepianie NSC poprawia przeżycie i integralność jednostki motorycznej SMA. W celu zbadania patologicznego korelacji tego fenotypowego polepszenia u myszy SMA, zbadano kohortę myszy (nieleczonych myszy SMA, n = 12, myszy SMA traktowanych, n = 12 i myszy z miotu WT, n = 12) w P10 (6 dla każdy warunek) i P13 (6 dla każdego stanu), analizując tkanki mięśniowe i rdzenia kręgowego. Oceniliśmy liczbę i rozmiar neuronów ruchowych w rogu przednim odcinka lędźwiowego rdzenia kręgowego
[patrz też: balsam szostakowskiego zastosowanie, przychodnia władysławowo, operacja ścięgna achillesa ]
[podobne: uzależnienie od leków przeciwbólowych, choroba refluksowa dieta, hydrominum skutki uboczne ]