Receptory adrenergiczne zapobiegają dezadaptacyjnej reakcji serca na przeciążenie ciśnieniowe ad 5

Zwiększona apoptoza miocytów ABKO przez a-adrenergiczne katecholaminy podniosła możliwość podwyższenia poziomu a -AR w miocytach ABKO. Aby to przetestować, zmierzyliśmy poziomy a -AR i sygnalizację w sercach i miocytach niepodlegających TAC. W sercach ABKO nie obserwowano zmian w wiązaniu a-S znormalizowanym na mg białka, we frakcji a2-AR przez wiązanie kompetycyjne, lub w mRNA ai i a2 przez ochronę RNazą (Figura 7A). Wartości bezwzględne wiązania .AR w sercu wynosiły 41. 3 fmol / mg białka dla ABKO i 36. 2 dla WT (n = 3; P = NS). Procent wiązania. 2 wynosi 25%. 4% dla ABKO (n = 6) i 23%. 6% dla WT (n = 5, P = NS). [125I] -cyanopindolol Kd był taki sam w ABKO (72. 18 pM) i WT (108. 22. M; P = NS). Figura 7A -AR w sercu i miocytach. (A i B) mRNA a -AR mRNA i poziomów białka i sygnalizacji cAMP badano w sercach ABKO (A) i izolowanych miocytach (B) bez uprzedniego TAC i nanoszono wskaźniki wartości średnich (ABKO / WT). (C i D) Krzywe reakcji na dawkę dla stymulacji ISO LVSP (C) i LVEDP (D). Stosunki wartości EC50 wykreślono w A. Patrz Wyniki dla wartości bezwzględnych. Jednak wyizolowane, perfundowane serce ABKO miało wyraźną odczulanie (wzrost EC50) stymulowanego przez ISO wzrostu ciśnienia skurczowego LV (LVSP) i obniżenie ciśnienia rozkurczowego końca LV (LVEDP) (Figura 7, A, C i D ). W izolowanym, perfundowanym sercu, EC50 dla stymulacji LVSP ISO (z granicami ufności 95%) wynosiło 4 nM (2. 8 nM) dla ABKO (n = 7) i 0,8 nM (0,5. nM) dla WT (n = 6; P <0,0001). EC50 dla LVEDP wynosiło 3 nM (1. 7 nM) dla ABKO (n = 7) i 0,4 nM (0,2. 0,8 nM) dla WT (n = 6, P <0,0001). Jednak poziomy serca GRK2 (. ARK1) i G. niezmienione przez Western blot (dane nie pokazane). W związku z tym serce ABKO miało odczuwanie .-AR bez zmian w poziomach a -AR lub w niektórych składnikach sygnałowych. W przeciwieństwie do serca, miocyty ABKO charakteryzowały się znaczącym zmniejszeniem o 44% wiązania a -AR znormalizowanym na komórkę, znaczącym 54% zmniejszeniem maksymalnego stymulowanego przez ISO cAMP na miocyt, bez znaczącej zmiany w EC50 i 50% redukcji w Fosforylacja fosfolambanu stymulowana przez ISO na serynie 16, głównym miejscu kinazy białkowej A (38) (Figura 7B i dane nie pokazane). Z drugiej strony, miocyty ABKO nie wykazywały żadnych zmian w wiązaniu (3 -AR na jednostkę białka lub poziomów mRNA P-a na jednostkę RNA (Figura 7B). Wartości bezwzględne wiązania a -AR w izolowanych miocytach jako fmol na 6000 komórek wynosiły 10. 0,3 dla ABKO i 19. 4 dla WT (n = 3, P <0,05), podczas gdy wartości bezwzględne jako fmol / mg białka wynosiły 18. 4 dla ABKO i 19. 3 dla WT (n = 3; P = NS). Białka a 1- i a2-AR na mg całkowitego białka miocytów również pozostały niezmienione metodą Western blot, chociaż prążki białkowe nie były konsekwentnie nieobecne w kontrolnych sercach a -ARKO serca (danych nie przedstawiono). Dla mRNA y -AR za pomocą ilościowego RT-PCR, cząsteczki mRNA (x 10 A 9/50 ng RNA) wynosiły 14. 5 dla. ABKO i 12. 2 dla. WT; 14. 2 dla. 2 ABKO i 10. 2 dla. 2 WT; i 0,007. 0,001 dla. 3 ABKO i 0,005. 0,002 dla> 3 WT (n = 3; P = NS). Procent każdego mRNA podtypu wynosił 46% dla. ABKO i 55% dla. WT; 55% dla. 2 ABKO i 45% dla. 2 WT; i 0,02% dla> 3 ABKO i 0,04% dla <3 WT (n = 3, P = NS). MRNA a1 i a2 na jednostkę RNA były również takie same w miocytach ABKO i WT przez ochronę RNazą (n = 3, dane nie pokazane). Wartości stymulacji cAMP przez ISO w miocytach (maksymalna fmol cAMP / 20 000 komórek) wynosiły 9 261. 646 dla ABKO i 20322. 1,765 dla WT (2 krzywe z 7 dawkami plus nośnik; P <0,05). EC50 dla stymulacji cAMP przez ISO w miocytach wynosiło 33 nM (14. 76 nM) dla ABKO i 22 nM (8. 63 nM) dla WT (2 krzywe; P = NS). Obniżony poziom sygnału cAMP w miocytach nie został skorygowany przez inaktywację Gul z toksyną krztuśca (PTX) (Figura 7B), a cAMP stymulowany forskoliną był identyczny w miocytach ABKO i WT, co sugeruje normalną sygnalizację postreceptorową. Wartość cAMP (fmol / 20 000 komórek) z ISO plus PTX wynosiła 15,033 dla ABKO i 42 923 dla WT (n = 2). Objętość cAMP z forskoliną wynosiła 64367 dla ABKO i 65 696 dla WT (n = 2). Ponadto, metodą Western blot, białka G w miocytach (GRK2, GRK2 / 3, Gs, GłO, Gó q i G)) zostały nieznacznie zredukowane (dane nie pokazane), proporcjonalnie do 25% redukcji w wielkość miocytów (1). Podsumowując, dane te jasno pokazują, że poziomy białka a -AR i mRNA oraz sygnalizacja cAMP nie były zwiększone w sercu ABKO i miocytach przed TAC, ale zamiast tego funkcja. -AR była odczulona w sercu ABKO i obniżona w miocytach ABKO. . Co ciekawe, samice myszy ABKO wykazywały odczulanie skurczu stymulowanego ISO, chociaż samice myszy ABKO są mniej podatne na działanie niż samce myszy ABKO (1), a samice myszy obu genotypów były mniej wrażliwe na ISO niż mężczyźni obu genotypów. [patrz też: szczepionka na dur brzuszny, hydrominum skutki uboczne, problemy z tarczycą objawy ] [więcej w: choroba refluksowa dieta, hydrominum skutki uboczne, samotne dziewczyny szukajace chłopaków ]