Receptory adrenergiczne zapobiegają dezadaptacyjnej reakcji serca na przeciążenie ciśnieniowe ad 8

Wyniki te sugerują ostrożność w stosowaniu antagonistów a1, szczególnie u pacjentów z chorobą sercowo-naczyniową. Sugerując, że aktywacja 1-AR może być korzystna i adaptacyjna, wyniki zapewniają również alternatywny wgląd w neurohormonalny paradygmat w niewydolności serca i zwiększają prawdopodobieństwo, że agoniści. 1-AR mogą być kandydatami terapeutycznymi w niewydolności serca. Metody Myszy. Myszy 1A-AR i .1B-AR podwójnego KO (ABKO) wytworzono jak opisano wcześniej (1). Większość eksperymentów wykorzystywała kongeniczne samce myszy C57BL / 6J szóstej i siódmej generacji, w wieku 10-12 tygodni. Myszy z KO. 1-ARs lub. 2-AR były hojnym darem Daniela Bernsteina (Stanford University, Stanford, California, USA) (75). Opieka nad zwierzętami i ich wykorzystanie w tych eksperymentach zostały zatwierdzone przez Komisje ds. Opieki nad Zwierzętami w San Francisco Veterans Affairs Medical Center i University of South Dakota (Vermillion, South Dakota, USA). Poprzeczne skurcze aorty. TAC przeprowadzono bez intubacji w znieczuleniu izofluranem (1), a chirurg był zaślepiony na genotyp. Gradient ciśnienia w stenozie po 2 tygodniach został oszacowany za pomocą echokardiografii u przytomnych myszy, która przewiduje gradient zmierzony przez cewnikowanie (19). Echokardiografia. Badanie echokardiograficzne wykonano na przytomnych, delikatnie powściągliwych myszach, za pomocą Acuson Sequoia C256 (Siemens), stosując 15-MHz liniowy przetwornik macierzowy, a wymiary komory mierzono z echokardiogramów M-mode z prowadzeniem 2-wymiarowym (19, 76). Echokardiograf był zaślepiony na genotyp. Histologia serca. Serca kaniulowano przez wierzchołek LV in situ, oczyszczono przez perfuzję za pomocą PBS przy 70 mmHg, aresztowano w rozkurczu przy użyciu 60 mM KCl, utrwalono przez perfuzję 4% paraformaldehydem, zatopiono w parafinie i podzielono na 8 pm. Dla obszaru przekroju miocytów, przekroje wieńcowe poddano deparafinizacji i wybarwiono na błony ze sprzężoną z fluoresceiną aglutyniną z kiełków pszenicy (Invitrogen Corp.) i dla jąder z Hoechst 33342 (Calbiochem), a obszar miocytów mierzono za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej przy powiększeniu x 400 ( Nikon Eclipse E600, Nikon Inc.) przy użyciu obrazu NIH (1). W przypadku zwłóknienia przekroje wieńcowe wybarwiono kolagenem z czerwienią Sirius, a komórki komórkami o zielonej barwie szybko i zabarwionym na czerwono zmierzono za pomocą mikroskopii fazowej przy powiększeniu x 400 (Nikon Eclipse E600) przy użyciu oprogramowania Image-Pro (MediaCybernetics). Operatorzy byli zaślepieni na genotyp i grupę leczenia. Test ochrony przed RNazą dla mRNA miocytów. MRNA dla MyHC, SkAct, SERCA, ANF i 18S (Ambion Inc.) wykryto za pomocą testu ochrony rybonukleazą (RPA III; Ambion Inc.) z sondami RNA znakowanymi szczurami, stosując 3 .g całkowitego RNA komorowego wyizolowanego z po operacji i myszy TAC po 4 tygodniach (TRIzol; Invitrogen Corp.). Prążki zostały określone ilościowo przy użyciu PhosphorImager (Bio-Rad Laboratories) i znormalizowane do 18S (Ambion Inc.) (77). Apoptoza w nienaruszonym sercu. Apoptozę mierzono za pomocą testów TUNEL na skrawkach zatopionych w parafinie przy użyciu zestawu ApopTag Red In Situ Apoptosis Detection (Serologicals Corp.), z wyjątkiem tego, że skrawki traktowano 0,1% saponiny i mM EGTA przed barwieniem TUNEL (31). Liczenie komórek TUNEL-dodatnich wykonano z zaślepieniem na genotyp i leczenie. PKC. cięcie zmierzono w ekstraktach komorowych metodą Western blot, stosując przeciwciała przeciwko całkowitej PKC. (nr 610397, BD Biosciences. Clontech) i fosfo-PKC. T505 (nr 9374; Technologia sygnalizacji komórkowej). Prążki wykryto metodą chemiluminescencji (Amersham Biosciences) i określono ilościowo za pomocą oprogramowania ImageQuant (Amersham Biosciences). Izolacja i hodowla komórek miocytów dorosłych myszy. Miocyty komorowe izolowano przez perfuzję kolagenazą, wysiano na 50 komórek w kształcie pręta na milimetr kwadratowy na powlekanych lamininą 35-mm płytkach lub 2-dołkowych szkiełkach i hodowano w MEM z HBSS i 0,1 mg / ml BSA przy 2% CO2 i 37 ° C (1, 78). Apoptoza w izolowanych miocytach. Hodowane miocyty traktowano przez 2 godziny agonistami, a apoptozę mierzono za pomocą przeciwciała przeciw aneksynie V (Annexin-V-FLUOS, Roche Diagnostics Corp.). Biwalinian H2O2, l-NE, l-ISO HC1 i kwas askorbinowy (nośnik, końcowe stężenie 100 uM) pochodziły z Sigma-Aldrich. Wiązanie a -AR w sercach i miocytach. Testy wiązania wykorzystywały zarówno całkowite homogenaty świeżo izolowanych miocytów, jak i membrany wytworzone z komór i miocytów przez homogenizację (0,25 M sacharoza, 30 mM histydyna, mM EDTA [pH 8,0], PMSF, inhibitory proteazy) i wirowanie dwukrotnie przy 100 000 g (79 ). W analizach saturacji użyto 0,04 (1,2-M [125I] cyjanopindololu (PerkinElmer), z .M dl-propranololu (Sigma-Aldrich) w celu określenia niespecyficznego wiązania (80).
[przypisy: kawa rozpuszczalna skład, prostowanie keratynowe cennik, ciekawe aplikacje na telefon ]
[hasła pokrewne: kawa rozpuszczalna skład, ciekawe aplikacje na telefon, przychodnia władysławowo ]