Rola regulacyjna anafilatoksyny C5a w odporności typu 2 na astmę ad 10

Ponadto nie zaobserwowaliśmy żadnego skurczu ASM ani zapalenia dróg oddechowych po wkropleniu C5a / C5adesArg do myszy, które nie były naiwne w stężeniach, które spowodowały niewydolność oddechową, silny skurcz dróg oddechowych, zapalenie i 50% śmiertelność u świnek morskich (38). Dane te sugerują, że C5aR nie ma bezpośredniego wpływu na skurcz ASM i / lub że ligacja C5aR na komórkach pierwotnych nie jest wystarczająca do uwolnienia mediatorów oskrzelowych, które indukują skurcze ASM u świnek morskich (58). Przeciwnie, C5a i C5adesArg indukują skurcz ASM i nasilają zapalenie dróg oddechowych w stanach zapalnych, co sugeruje, że ligacja C5aR na infiltrujących komórkach (np. Neutrofilach, eozynofilach) i / lub regulacja w górę i ligacja C5aR na komórkach rezydujących w płucach (komórki nabłonka, ASM ) jest warunkiem wstępnym odpowiedzi skurczowej. Wyższa moc C5adesArg do wywoływania skurczu oskrzeli może być wyjaśniona przez jego funkcję jako superaginisty do uwalniania IL-13 z bazofilów (59). Podsumowując, nasze dane dostarczają nowych informacji na temat procesu regulacji tolerancji inhalacyjnej i rozwoju odporności adaptacyjnej typu 2 w eksperymentalnej astmie alergicznej. Nasze dane sugerują, że sygnalizacja C5aR na interfejsie komórek DC / T podczas primingu alergenów zapewnia ochronę przed reakcjami zapalnymi na nieszkodliwe antygeny na powierzchni śluzówki. Ten spór potwierdzają dane z badań przesiewowych na genomie dla loci podatności na astmę, które zidentyfikowały powiązanie astmy i pokrewnych cech z regionami chromosomalnymi zawierającymi zarówno C5 (9q34), jak i C5aR (19q13.3) (60, 61). Ponadto stwierdzono, że niektóre allele C5 są związane z ochroną przed rozwojem astmy dziecięcej i dorosłych [62]. Wyraźnie celowanie C5aR w ustalonym środowisku alergicznym zmniejsza zapalenie dróg oddechowych i AHR, co sugeruje korzystny wpływ blokady C5aR w astmie. Jednak takie podejście może okazać się pyrrusowym zwycięstwem, ponieważ wzmożona produkcja cytokin efektorowych Th2 może promować niekorzystny wpływ na architekturę płuc. W tym celu nie można ocenić, który z 2 efektów przeważa w dłuższej perspektywie i zdecydować, czy C5aR może służyć jako przydatny cel terapeutyczny w astmie u ludzi. Metody Myszy Tg. W celu wytworzenia myszy C5aRA Tg, cDNA C5aRA wklonowano do plazmidu (tetO) 7-CMV pomiędzy minimalny promotor (tetO) 7-CMV i 3. nieulegający translacji region bydlęcego genu hormonu wzrostu (bGH) zawierający introny i sygnał poliadenylacji (pA) (Figura 4A). Linie mysie Tg ustalono po mikroiniekulacji konstruktu (tetO) 7-CMV-C5aRA do zapłodnionych oocytów FVB / N (Transgenic Animal Facility, Children s Hospital, Cincinnati, Ohio, USA). Warunkowa czasowa i przestrzenna regulacja ekspresji C5aRA nabłonka oddechowego została osiągnięta przy użyciu rtTa eksprymowanej pod promotorem specyficznym dla komórki Clara (Ccsp) (30). W celu warunkowej ekspresji C5aRA Tg, myszy aktywujące Ccsp-rtTa (30) zostały wyhodowane na docelowych myszach (tetO) 7-CMV-C5aRA (pojedyncza transgeniczna C5aRA [C5aRA sTg]), produkując potomstwo podwójnej Tg (dTg) (C5aRA- Ccsp dTg). Genotypy określono na podstawie DNA ogonowego metodą PCR. Myszy C5aRA sTg i C5aRA-Ccsp dTg użyte do eksperymentów były na mieszanym tle FVB / N / BALB / c. Myszy. Samice myszy BALB / c (Jackson Laboratory), myszy C5aRA Tg i myszy z niedoborem C5aR (63) (krzyżowane wstecznie z tłem BALB / c; n = 7) utrzymywano w specjalnym patogenie Cincinnati Children. S Hospital Medical Center. placówka i używane w wieku 6. 8 tygodni. Opieka nad zwierzętami została zapewniona zgodnie z wytycznymi NIH. Badania te zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Poradnictwa Zwierząt w Cincinnati Children s Hospital Medical Center. Cytometrii przepływowej. Aby odróżnić odrębne podzbiory DC i określić fenotyp powierzchniowy DC i komórek T, pojedyncze zawiesiny komórek płucnych wybarwiono w analizie wielokolorowej za pomocą następujących Ab: CDllc, APC (HL3); CD69, PE-Cy7 (H1,2F3); CD11b, PE-Cy7 (M1 / 70); Gr-1, APC-Cy7 (RB6-8C5); B220, PE (RA3-6B2) (wszystkie z BD Biosciences. Pharmingen); CD4, APC (RM4-5) (z eBioscience); mPDCA-1 APC lub PE (Miltenyi Biotec) (F4 / 80); FITC (CI, A3-1) (Serotec). Alternatywnie, barwiono je odpowiednimi, ISO-CTRL Ab: (szczurzy IgG2b, APC-Cy7 (A95-1), szczur IgG2b, PE-Cy7 (A95-1), chomik IgG1, PE (A19-3); IgG2a, PE (R35-95), szczurze IgG2b, FITC (R35-95), chomicze IgG1, APC (A19-3), chomicze IgG1, PE-Cy7 (G235-2356) (wszystkie z BD Biosciences. Pharmingen); chomik IgG, FITC (eBioscience) Fenotyp płucnych podzbiorów DC określono za pomocą następujących markerów: CD11c, CD11b, Gr-1, B220, F4 / 80 i mPDCA-1
[podobne: problemy z tarczycą objawy, sennik karmienie piersią, prostowanie keratynowe cennik ]
[przypisy: piramida żywieniowa dla dzieci, uzależnienie od leków przeciwbólowych, choroba refluksowa dieta ]