Rola regulacyjna anafilatoksyny C5a w odporności typu 2 na astmę ad

Wcześniejsze badania skupiły się całkowicie na roli C5 lub C5a podczas fazy efektorowej odpowiedzi alergicznej, pomijając możliwy wpływ C5a na uczulenie alergenem, które może wyjaśniać kontrowersyjne wyniki. Obecne badanie zostało zaprojektowane w celu wypełnienia tej luki i niezależnego analizowania roli C5a w każdej fazie odpowiedzi alergicznej. W tym celu skoncentrowaliśmy się na 2 modelach ekspozycji płucnych, stosując OVA prowadzące do tolerancji inhalacyjnej (23) lub roztocza kurzu domowego (HDM) indukujące uczulenie na Th2, zapalenie dróg oddechowych i AHR (24). Stwierdziliśmy, że celowanie C5aR in vivo podczas początkowej ekspozycji na alergen płucny jest związane z indukcją lub wzmocnieniem odporności adaptacyjnej Th2, eozynofilowego zapalenia dróg oddechowych i AHR. Natomiast celowanie C5aR w ustalonym środowisku zapalnym zmniejszyło zapalenie dróg oddechowych i AHR, co sugeruje drugą, proalergiczną rolę C5a poprzez jego właściwości prozapalne na komórkach rezydentnych i / lub infiltrujących. Wyniki Ablacja sygnalizacji C5aR podczas początkowej ekspozycji na OVA w płucach indukuje zapalenie dróg oddechowych, pochylenie Th2, produkcję śluzu i AHR. Wykazano, że donosowe podawanie OVA indukuje tolerancję inhalacyjną specyficzną dla antygenu (25, 26). Podobnie, w naszym modelu podania dotchawiczego OVA (opisanego na ryc. 1) nie stwierdziliśmy wzrostu produkcji cytokin Th1 (IL-4, IL-5, IL-10 lub IL-13) lub Th1 (Dane nie pokazane w IFN-y) z komórek płucnych izolowanych 24 godziny po końcowej ekspozycji na OVA w porównaniu z kontrolami PBS (Figura 2A). Ponadto, stężenia IgE w surowicy były nieodróżnialne od kontroli PBS (Figura 2B). Całkowita liczba komórek w płynie do płukania oskrzelowo-pęcherzykowego (BAL) była nieznacznie podwyższona, co było głównie spowodowane zwiększeniem liczby neutrofilów (Figura 2C). W tkance płucnej stwierdziliśmy niewielkie nacieki peribronowo-plazmowe i wytwarzanie śluzu (rysunek 2D i dodatkowa figura 1A, materiał uzupełniający dostępny online w tym artykule; doi: 10.1172 / JCI26582DS1). Zgodnie z brakiem adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej i jedynie niewielkim zapaleniem neutrofilowym, ekspozycja płucna na OVA powodowała niewielką odpowiedź dróg oddechowych, która była nieodróżnialna od kontroli traktowanych PBS (Figura 2E). Ryc. 1Protokole leżące u podstaw różnych modeli alergii płucnej. (A) Model tolerancji inhalacyjnej OVA. Zwierzęta były narażone na działanie OVA we wskazanych punktach czasowych. Aby zablokować sygnalizację C5aR, zwierzęta były leczone mAb anty-C5aR w dniach a i 20. Dwadzieścia cztery godziny po końcowej ekspozycji na alergen, określano reakcję dróg oddechowych. Następnie pobrano próbki BAL, tkanki płucnej i krwi. (B) Model HDM alergii płucnej, w której C5aR był zablokowany podczas początkowej ekspozycji na alergen. Zwierzęta poddano działaniu HDM we wskazanych punktach czasowych (lewy panel). Aby zablokować przekazywanie sygnału przez C5aR, zwierzęta były leczone mAb anty-C5aR w dniach 1, 6, 13 i 20. Siedemdziesiąt dwie godziny po końcowej ekspozycji na HDM określono odpowiedź reaktywności dróg oddechowych. Następnie pobrano próbki BAL, tkanki płucnej i próbki krwi. W przypadku prawego panelu procedura była taka, jak powyżej, z wyjątkiem tego, że C5aR był zablokowany przez ekspresję płucną C5aRA. Ekspresję C5aRA zapoczątkowano 7 dni przed ekspozycją na alergen poprzez uzupełnienie wody do picia dox (0,5 mg / ml). Dox był przechowywany w wodzie pitnej przez cały eksperyment. (C) Procedura była jak w B, z tym wyjątkiem, że C5aR został zablokowany wyłącznie przed końcową ekspozycją HDM w dniu 20. Figura 2C5aR indukuje adaptacyjne odpowiedzi odpowiedzi na Th2 i eozynofilowe zapalenie dróg oddechowych w odpowiedzi na ekspozycję na OVA płuc. (A) Profil cytokin komórek płuc pobranych od myszy BALB / c 24 godziny po końcowej ekspozycji na OVA. Supernatanty zebrano po 72 godzinach hodowli in vitro. (B) Stężenie całkowitej IgE w surowicy. (C) Całkowita i różna liczba komórek w BAL. (D) Badanie histologiczne zapalenia dróg oddechowych. Skrawki wybarwiono do produkcji śluzu za pomocą PAS (lewe panele) i H & E (prawe panele). Oryginalne powiększenie, × 200. (E) Reaktywność dróg oddechowych na iv acetylocholinę (Ach). Reaktywność dróg oddechowych wyraża się jako zintegrowaną czasowo zmianę ciśnienia w drogach oddechowych nad ciśnieniem podstawowym (APTI). Na wszystkich rysunkach podane wartości są średnie. SEM; n = 8. 10 na grupę. ** P <0,001; * P <0,05. Przeciwnie, zaobserwowaliśmy znaczącą produkcję cytokin Th2, wysokie poziomy IgE w surowicy i zasadną rekrutację komórek zapalnych (eozynofili, neutrofili i limfocytów w BAL), gdy przekazywanie sygnału za pośrednictwem C5aR zostało zniesione przez wykorzystanie myszy z niedoborem C5aR (suplement Figura 2) lub przez farmakologiczne celowanie C5aR przed początkową ekspozycją na alergen płucny, stosując neutralizujące przeciwciało swoiste przeciwko C5aRa (27) (Figura 2, ACH) [podobne: przychodnia władysławowo, balsam szostakowskiego zastosowanie, ciekawe aplikacje na telefon ] [patrz też: aerius dawkowanie, chrypka icd 10, trittico ulotka ]