Rola regulacyjna anafilatoksyny C5a w odporności typu 2 na astmę cd

Wykazano, że mAb anty-C5aR neutralizuje sygnalizację C5aR w kilku modelach in vivo astmy alergicznej i choroby kompleksu immunologicznego. Warto zauważyć, że wielkość wytwarzania IL-5, IL-13 i IL-10 była 10-krotnie wyższa w odpowiedzi na celowanie farmakologiczne C5aR w porównaniu z ablacją C5aR z powodu niedoboru C5aR (Figura 2A w porównaniu z Suplementową Fig. 2A). Podobnie, wielkość zapalenia dróg oddechowych była bardziej wyraźna w odpowiedzi na farmakologiczną blokadę C5aR (Figura 2C w porównaniu z Suplementową Fig. 2B). Badanie histologiczne płuca 24 godziny po ostatniej prowokacji OVA wykazało gęste okołonaczyniowe i okołonaczyniowe nacieki, obejmujące głównie granulocyty eozynochłonne i limfocyty oraz obfite mucyny w komórkach nabłonka, gdy przekazywanie sygnału C5aR zostało zniesione w odpowiedzi na celowanie farmakologiczne (figura 2D i dodatkowa figura 1B). Ponownie, efekt był mniej wyraźny u myszy z niedoborem C5aR (dane nie pokazane). Ponadto stwierdzono silny wzrost AHR wywołanej alergenem w odpowiedzi na leczenie anty-C5aR (rysunek 2E). Niedobór C5aR nie miał wpływu na rozwój AHR (dodatkowa Figura 2C). Co ważne, celowanie farmakologiczne C5aR przy braku ekspozycji na OVA wywoływało lekkie zapalenia dróg oddechowych, wytwarzanie cytokin Th2, zwiększone stężenie IgE w surowicy i AHR (Figura 2). Dane te sugerują, że aktywacja C5aR podczas pobierania próbek alergenu dostarcza krytycznego sygnału zapobiegającego rozwojowi adaptacyjnych odpowiedzi immunologicznych Th2. Blokada C5aR podczas ekspozycji płucnej HDM zwiększa stan zapalny dróg oddechowych, przekrzywienie Th2, produkcję śluzu i AHR. Aby określić, czy ten ochronny wpływ C5a ma zastosowanie do naturalnych antygenów, które są związane z uczuleniem dróg oddechowych w ludzkiej astmie, ocenialiśmy wpływ blokady C5aR w mysim modelu astmy alergicznej wywołanej HDM (ryc. 1B i 3). W przeciwieństwie do inhalacji OVA, ekspozycja na HDM nie indukowała tolerancji, ale powodowała skosowanie Th2 związane z zapaleniem dróg oddechowych, wytwarzaniem śluzu i AHR (24). Zgodnie z oczekiwaniami, stwierdziliśmy wytwarzanie cytokin Th2 (IL-5, IL-13 i IL-10) z komórek płucnych wyizolowanych 72 godziny po ostatniej prowokacji alergenem (Figura 3A), podwyższone poziomy IgE i IgG1 w surowicy (Figura 3B), i zapalenie dróg oddechowych (Figura 3C), jak również dramatyczny wzrost AHR wywołanej alergenem (Figura 3D). Podawanie mAb anty-C5aR podczas początkowego spotkania antygenu wiązało się ze znacznie zwiększoną produkcją cytokiny Th2 z komórek płucnych i zwiększonymi stężeniami IgE i IgG1 w surowicy, jak również zwiększonym zapaleniem dróg oddechowych (Figura 3, ACH). Co ważne, komórki płucne nie wytwarzały IFN-y w odpowiedzi na immunizację HDM albo w obecności lub nieobecności blokady C5aR (dane nie pokazane). Ponadto, blokada C5aR dodatkowo wzmocniła już wyraźną indukowaną alergenem AHR u myszy eksponowanych na HDM (Figura 3D). Figura 3C5aR ukierunkowuje adaptacyjne odpowiedzi immunologiczne Th2 i eozynofilowe zapalenie dróg oddechowych w odpowiedzi na ekspozycję płucnego HDM. (A) Profil cytokin komórek płuc pobranych od myszy BALB / c 72 godziny po końcowej ekspozycji HDM in vivo. (B) Stężenia całkowitej IgE w surowicy i IgG1 specyficznej dla alergenu. (C) Badanie histologiczne zapalenia dróg oddechowych. Skrawki wybarwiono do produkcji śluzu za pomocą PAS (lewe panele) i H & E (prawe panele). (D) Reagowanie na drogi oddechowe na iv Ach. n = 8. 10 na grupę. ** P <0,001; * P <0,05. W podejściu komplementarnym, przekazywanie sygnału przez C5aR było blokowane przez specyficzną dla płuc ekspresję antagonisty C5aR (C5aRA) (29) u myszy C5aRA Tg. W szczególności, wytworzyliśmy myszy eksprymujące rozpuszczalny C5aRAA8a7a 73 pod warunkową kontrolą promotora białka sekrecyjnego komórki Clara (Ccsp) i odwrotnego transaktywatora tetracykliny (rtTa) (Figura 4A) (30). A8 (3 7 73 to mutant C5a, który został wybrany po losowej mutagenezie z biblioteki prezentacji fagowej i który skutecznie blokuje uszkodzenie tkanki pośredniczone przez C5a (29, 31, 32). Indukcję C5aRA zapoczątkowano na tydzień przed początkowym uczuleniem antygenu przez podanie doksycykliny (dox), co spowodowało ekspresję specyficzną dla płuc w proksymalnych komórkach nabłonkowych dróg oddechowych (Figura 4, B i C). Ponownie, stwierdziliśmy zwiększoną produkcję cytokin Th2 i eozynofilowego zapalenia dróg oddechowych, gdy C5aR był zablokowany, nawet przy braku ekspozycji na alergen (Figura 4D). Figura 4Generacja i charakterystyka myszy C5aRA Tg. (A) Generowanie myszy C5aR Tg (patrz Metody). rCCSP, specyficzny promotor komórki szczurzego clara; hGHpA, sygnał poliadenylacji ludzkiego hormonu wzrostu; bGHpA, sygnał poliadenylacji bydlęcego hormonu wzrostu. (B, górny lewy panel) Myszy Ccsp-rtTa sTg (545 bp, linia 1) były hodowane do (tetO) myszy 7-CMV-C5aRA sTg (228 pz, ścieżka 2) w celu wytworzenia potomstwa C5aRA-Cssp dTg (C5aRA-Ccsp dTg, linia 3) [podobne: operacja ścięgna achillesa, uzależnienie od leków przeciwbólowych, sennik karmienie piersią ] [podobne: medicor rzeszow, xarelto apteka internetowa, urofuraginum dla dzieci ]