Rola regulacyjna anafilatoksyny C5a w odporności typu 2 na astmę czesc 4

Kinetyka indukcji płucnego mRNA C5aRA u myszy C5aRA-Ccsp dTg. RT-PCR wykonano z próbek myszy C5aRA-Ccsp dTg w pełnym płucu, które otrzymywały wodę pitną bez doks (dzień 0) lub wodę uzupełnioną doks (0,5 mg / ml) przez dzień, 3 dni lub 7 dni. Reakcje kontrolne ze starterami GAPDH przedstawiono na dolnym panelu. (Panel dolny) Specyficzność narządową aktywacji Tg u myszy dTg C5aRA-Ccsp leczonych dox przez 7 dni. Ścieżka 1, płuco od myszy C5aRA sTg; ścieżki 2. 7, wątroba, śledziona, nerki, serce, mózg i płuco od myszy C5aRA-Ccsp dTg; ścieżka 8, genomowy DNA z C5aRA-Ccsp dTg (kontrola pozytywna). (C) Ekspresja białka C5aRA w komórkach nabłonka płuc (oznaczonych strzałkami) od myszy C5aRA-Ccsp dTg traktowanych przez 7 dni dołkiem. Barwienie immunohistochemiczne przy użyciu mAb anty-C5a 561: Alexa488 (lewy panel); ISO-Ctrl (prawy panel). Nie stwierdziliśmy ekspresji białka C5aRA w komórkach nabłonka płuc myszy sTg C5aRA traktowanych dox (dane nie przedstawione). (D, lewy panel) Całkowita i różna liczba komórek w BAL. (Prawy panel) Profil cytokin komórek płuc pobranych od myszy BALB / c 72 godziny po końcowej ekspozycji HDM in vivo. Profile cytokin i liczba komórek BAL otrzymanych z myszy rasy miotowej bez Tg eksponowanych na HDM były nieodróżnialne od tych myszy sTg C5aRA sTg eksponowanych na HDM (dane nie pokazane). * P <0,05; ** P <0,001. Łącznie dane te potwierdzają wyniki uzyskane w modelu OVA i sugerują, że obecność C5a w drogach oddechowych w czasie początkowego spotkania antygenu służy zapobieganiu (OVA) lub zmniejszaniu (HDM) rozwoju odpowiedzi immunologicznych za pośrednictwem Th2. Warto zauważyć, że znaleźliśmy dowody aktywacji dopełniacza w BAL u myszy eksponowanych na OVA lub HDM, porównywalnych z tymi uzyskanymi w BAL u ludzi cierpiących na astmę 48 godzin po segmentowym prowokacji alergenem (9) (Suplementowa Figura 3). Odrębne dystrofie płucne DC wyrażają C5aR. Nasze dane wskazujące, że ablacja przekaźnictwa C5aR przed uczuleniem alergenem wzmaga adaptacyjne odpowiedzi immunologiczne Th2 pozwalają postawić hipotezę, że C5a ma wpływ na interakcję płucnych DC i naiwnych limfocytów CD4 +. DC są nie tylko uważane za kluczowe dla początkowego różnicowania Th2 naiwnych limfocytów CD4 + w odpowiedzi na aeroalergeny, ale są również niezbędne do utrzymania stanu zapalnego w drogach oddechowych poprzez kontrolowanie rekrutacji i aktywacji primowanych komórek efektorowych Th2 w tkance płucnej. Tak więc, aby rozpocząć określanie wpływu C5a na interakcję między DC płucnymi a limfocytami CD4 +, fenotypowaliśmy odrębne podzbiory DC płuc u naiwnych myszy BALB / c i określiliśmy ich ekspresję C5aR. Najpierw określiliśmy płucne DC jako komórki CD11c + (Figura 5A). Następnie wyodrębniliśmy odrębne podzbiory DC przez obecność Gr-1 (antygen różnicowania mieloidowego) i markery CD11b (Figura 5A). Zidentyfikowaliśmy 3 różne populacje DC w następujący sposób: (a) CDllc + CDllb + Gr-1 a; (b) CDllc + CDllb + Gr-1 +; i (c) komórki CD11c + CDllb . Gr-1 +. Ponadto zidentyfikowaliśmy populację CD11c + CD11b. Gr-1. komórki, z których większość stanowiły makrofagi F4 / 80 + (dane nie pokazane). Skupiliśmy się głównie na CD11c + CD11b + Gr-1. komórki, które uważaliśmy za mieloidalne DC (mDC) i komórki CD11c + CD11b. Gr-1 +, które uważaliśmy za plazmacytoidowe DC (pDC). PDCs zostały dodatkowo scharakteryzowane poprzez ekspresję mysiego antygenu pDC-1 (mPDCA-1), markera powierzchniowego, który jest selektywnie eksprymowany na mysich pDCs (33), B220 (Figura 5A, dolny lewy panel) i Gr-1 (rysunek 5A, dolny środkowy panel). Co ważne, wszystkie podzbiory DC wyrażały C5aR, chociaż w różnym stopniu (Figura 5A). Figura 5: Charakterystyka cytometryczna i funkcjonalna płucnych populacji DC. (A, środkowy lewy panel) Wykres punktowy komórek płucnych izolowanych od naiwnych myszy BALB / c i podwójnie wybarwiony pod kątem ekspresji CD11c (oś x) i 7-amino-aktynycyny D (7AAD, oś y). (Górny środkowy panel) Wykres punktowy 7AAD. oraz komórki CD11c +, które podwójnie wybarwiono dla Gr-1 (oś x) i powierzchniowej ekspresji CD11b (oś y). (Dolny lewy panel) Wykres punktowy CD11c + CD11b. komórki bramkowane, które zabarwiono na ekspresję mPDCA-1 / B220; procenty w obszarach pudełkowych wskazują częstotliwość komórek CD11c +, które były mPDCA-1 + B220. i mPDCA-1 + B220 +, odpowiednio. (Dolny środkowy panel) Wykres punktowy CD11c + CD11b. komórki bramkowane, które zostały zabarwione na ekspresję mPDCA-1 / Gr-1. Procent w obszarach pudełkowych wskazuje częstotliwość komórek CD11c +, które są mPDCA-1 + Gr-1. i odpowiednio mPDCA-1 + Gr-1 +. (Górny lewy panel) Ekspresja C5aR na mDC (komórki CDllc +, CDllb + i Gr-lp). (Górny prawy panel) Ekspresja C5aR na komórkach CD11c +, CD11b + i Gr-1 +. (Dolny prawy panel) Ekspresja C5aR na pDC (komórki CDllc +, CDllb