System FGF odgrywa kluczową rolę w regulowaniu integralności naczyń cd

W zgodzie z obserwowaną utratą integralności układu naczyniowego tchawicy, zaobserwowano znaczny wzrost retencji błękitów Evansa w mięśniu szkieletowym u myszy eksponowanych na sFGFR1IIIc, ale nie na wirusa sFGFR3IIIb i kontrolnych (Figura 2B). W tym samym niebieskim oznaczeniu Evans wykazano znaczny wzrost przepuszczalności zarówno w tkance mięśnia sercowego, jak i w tkance płucnej u myszy eksponowanych na sFGFR1IIIc i sFGFR3IIIc, ale nie u zwierząt kontrolnych lub sFGFR3IIIb (Figura 2C). Figura 2 Znieczulona integralność naczyń u myszy pozbawionych sygnalizacji FGF. (A) Zwiększona przepuszczalność naczyń i zaburzona morfologia śródbłonka u myszy sFGFR1IIIc. Dziesięć dni po wstrzyknięciu adenowirusa myszom C57BL / 6, naczynia krwionośne tchawicy wybarwiono na CD31 (czerwony). Zielony reprezentuje mikrokulki w przestrzeni pozanaczyniowej. Paski skali: 20 m (lewe panele); 10 m (prawy panel). (B) sFGFR1IIIc zwiększa przepuszczalność naczyń w mięśniu. Ad-Null (kontrola) lub Ad-sFGFR wstrzyknięto myszom C57BL / 6, a 14 dni później wstrzyknięto niebieski barwnik Evans iv Mięśnie grupy przywodziciela zebrano dla oceny ilościowej. Dane są wyświetlane jako średnie. SD (n = 4). * P <0,05, kontrola vs. sFGFR1IIIc według testu t. (C) Hamowanie sygnalizacji FGF w sercu i płucach zwiększa przepuszczalność naczyń. Ad-Null (kontrola), Ad-sFGFR wstrzyknięto myszom C57BL / 6, a 10 dni później, barwniki błękitów Evansa zbadano w sercu i płucu. Dane są wyświetlane jako średnie. SD dla n = 7, kontrola; n = 8, sFGFR1IIIc; n = 4, sFGFR3IIIb; n = 4, sFGFR3IIIc. * P <0,05, w porównaniu z kontrolą za pomocą testu t. (D) Zwiększona przepuszczalność naczyń w nagiej myszy traktowanej Ad-sFGFR1IIIc3. Myszy nagie NU / NU (Charles River Laboratories) poddano tchawicy CD31. W tchawicy naczyniowej traktowanej Ad-sFGFR1IIIc (3 strzałki nie obserwowano w pełni junctional CD31 obserwowanego w kontroli (strzałki). Paski skali: 20 m (lewe panele); 10 m (prawy panel). (E) Krwotok obserwowano w płucu i sercu myszy leczonych Ad-sFGFR1IIIc3. Dziesięć dni po wstrzyknięciu adenowirusa myszom nagim, płuco i serce zebrano w celu barwienia H & E. Górne panele pokazują sekcje płuca, a dolne panele pokazują sekcje serca. Czarne strzałki wskazują na krwotok z serca. Oryginalne powiększenie, × 400. W celu oceny wpływu przedłużonej supresji sygnalizacji FGF, nagim myszom wstrzyknięto Ad-FGFR1IIIc-Fc. Po 8 tygodniach ekspozycji na pułapkę sFGFR1IIIc śmiertelność wynosiła 15,3%, w przeciwieństwie do myszy C57BL / 6, które wykazywały bardzo małą śmiertelność. Badanie histologiczne wykazało zaburzoną integralność naczyń krwionośnych w krążeniu tchawicy (fig. 2D) oraz rozproszone obszary zakrzepicy tętniczej i krwotok w płucach i sercu (Figura 2E). Aby uzyskać wgląd w przyczynę utraty integralności naczyniowej, śródbłonek tętnic prawidłowej tętnicy udowej szczura był eksponowany in vivo na wirus Ad-FGFR1DN lub Ad-Null. Dominujący negatywny konstrukt FGFR1 (FGFR1DN), skrócona forma cytoplazmatycznego mysiego FGFR1IIIc, jest w stanie tłumić sygnalizację wszystkich 4 FGFR poprzez heterodimeryzację z innymi izoformami FGFR (16, 21). Dwa dni po transdukcji wirusowej, barwne wybarwianie VE-kadheryną wykazało prawidłową morfologię śródbłonka w tętnicy eksponowanej na Ad-Null, podczas gdy nastąpiła utrata kontaktów komórek śródbłonka w tętnicy eksponowanej na FGFR1DN (Figura 3A). Pięć dni później większość komórek śródbłonka w eksponowanej tętnicy Ad-FGFR1DNa wydawała się okrągła i nie stykała się ze sobą, wskazując na dalszą utratę kontaktu komórki-komórka (Figura 3A). Co godne uwagi, komórki śródbłonka nie były już wyrównane wzdłuż osi przepływu krwi, co sugeruje utratę zdolności wyczuwania naprężenia ścinającego lub reagowania na niego. Podobne odkrycia, aczkolwiek nieco mniej dramatyczne, obserwowano zarówno w układzie tętniczym, jak i żylnym myszy z ogólnoustrojową ekspresją pułapki sFGFR1IIIc-Fc, co sugeruje, że efekt hamowania FGF nie jest ograniczony do układu naczyniowego tętnic (Figura 3B). Figura 3 Wpływ in vivo inhibicji FGF w śródbłonku. (A) Przygotowanie powierzchniowe tętnicy udowej szczurów transdukowane Ad-Null lub Ad-FGFR1DN (109 PFU). Segmenty tętnic transdukowano adenowirusami i wybarwiono na obecność VE-kadheryny (czerwony) i pokazano projekcję maksymalnej intensywności przekrojów 1-. M Z-Stack. W dniu 5, komórki śródbłonka utraciły kontakty komórka-komórka i szczeliny utworzone pomiędzy komórkami. Paski skali: 10 .m. (B) Mysia tętnica szyjna i żyła szyjna poddane ogólnoustrojowemu wirusowi Ad-Null lub Ad-sFGFR1IIIc. Segmenty tętnic barwiono na VE-kadherynę i pokazano projekcję maksymalnego natężenia odcinków 1-. M Z-Stack. Pręty skali: 20 m. Skaningowa mikroskopia elektronowa (SEM) potwierdziła utratę kontaktów komórka-komórka (Figura 4B) [podobne: sennik karmienie piersią, uzależnienie od leków przeciwbólowych, przychodnia władysławowo ] [hasła pokrewne: ultramedica kraków, pokrzywka icd 10, ortoprotex ]