Wykorzystanie profilowania transkrypcyjnego do opracowania testu diagnostycznego tolerancji operacyjnej u biorców przeszczepów wątroby

Część biorców przeszczepu wątroby jest w stanie przerwać wszystkie terapie immunosupresyjne bez odrzucania ich przeszczepów i uważa się, że są operacyjnie tolerancyjni dla przeszczepu. Jednak dokładna identyfikacja tych odbiorców pozostaje wyzwaniem. Aby zaprojektować klinicznie odpowiedni test molekularny tolerancji operacyjnej w transplantacji wątroby, przebadaliśmy wzory transkrypcji we krwi obwodowej 80 biorców przeszczepionej wątroby i 16 nieprzeszczepionych osób zdrowych, stosując mikromacierze oligonukleotydowe i ilościową PCR w czasie rzeczywistym. Doprowadziło to do odkrycia i zatwierdzenia kilku sygnatur genów zawierających niewielką liczbę genów zdolnych do identyfikacji tolerancyjnych i nietolerujących odbiorców z wysoką dokładnością. Wiele podzbiorów limfocytów krwi obwodowej przyczyniło się do wzorców transkrypcyjnych związanych z tolerancją, chociaż dominowały na nich komórki NK TCR i NK. Dane te sugerują, że profilowanie transkrypcyjne krwi obwodowej może być wykorzystane do identyfikacji biorców przeszczepów wątroby, którzy mogą przerwać leczenie immunosupresyjne i że wrodzone komórki odpornościowe prawdopodobnie odegrają główną rolę w utrzymaniu tolerancji operacyjnej w transplantacji wątroby. Wprowadzenie Utrzymanie prawidłowej funkcji aloprzeszczepu pomimo całkowitego przerwania podawania wszystkich leków immunosupresyjnych jest czasami zgłaszane w transplantacji narządów, szczególnie po transplantacji wątroby (1. 9). Pacjenci spontanicznie przyjmujący przeszczep są tradycyjnie uważani za. Operacyjnie. tolerancyjny i stanowią dowód na to, że tolerancja immunologiczna może być faktycznie osiągnięta u ludzi. My i inni udokumentowaliśmy różnice w fenotypie i ekspresji genów PBMC uzyskanych od operacyjnie tolerancyjnych biorców wątroby w porównaniu z pacjentami wymagającymi ciągłej farmakologicznej immunosupresji (10. 12). Podczas gdy obserwacje te dostarczyły cennych informacji na temat komórkowych i molekularnych podstaw ludzkiej tolerancji operacyjnej, przekształcenie tej informacji w klinicznie odpowiedni molekularny test diagnostyczny zdolny do identyfikacji tolerancji pozostaje wyzwaniem. W obecnym badaniu wykorzystaliśmy technologie profilowania ekspresji genów w celu skonstruowania i zatwierdzenia szeregu klasyfikatorów genomicznych tolerancji operacyjnej w transplantacji wątroby. W związku z tym przeanalizowaliśmy próbki krwi obwodowej od 38 dorosłych pacjentów po przeszczepieniu wątroby, wykorzystujących mikromacierze oligonukleotydowe i ilościowy PCR w czasie rzeczywistym (qPCR) i zidentyfikowaliśmy kilka modeli predykcyjnych zawierających bardzo niską liczbę genów, których poziomy mRNA dokładnie identyfikują operacyjnie tolerancyjną biorcę wątroby. Ten genomowy ślad tolerancji operacyjnej został porównany z wzorcami ekspresji genów uzyskanymi od zdrowych osób, potwierdzonymi w niezależnej kohorcie 23 dodatkowych biorców wątroby i wykorzystany do oszacowania częstości występowania tolerancji wśród stabilnych biorców przeszczepionych wątroby otrzymujących podtrzymujące leki immunosupresyjne (biorcy STA ). Ponadto, dokładnie przeanalizowano wpływ potencjalnie zakłócających zmiennych klinicznych i specyficznych podzbiorów PBMC na sygnatury genów związane z tolerancją. Nasze dane sugerują, że pomiar ekspresji niewielkiej liczby genów we krwi obwodowej może stanowić solidny nieinwazyjny test diagnostyczny tolerancji operacyjnej w klinicznym transplantacji wątroby. Wyniki Wykrycie genu kandydata i wewnętrzna walidacja danych z mikromacierzy. Aby ocenić różnicową ekspresję genów między tolerancyjnymi i nietolerującymi biorcami, przeprowadzono eksperymenty z użyciem mikromacierzy oligonukleotydowych na komórkach PBMC uzyskanych od 17 przeszczepionych wątroby (TOL) i 21 nietolerujących przeszczepów wątroby (innych niż TOL) (Tabela i Figura 1). Wstępna porównawcza analiza statystyczna wykorzystująca znaczącą analizę mikromacierzy (SAM) dała w sumie 2482 sond (odpowiadających 1932 genom i 147 znacznikom sekwencji wyrażonym) z fałszywym współczynnikiem odkrycia (FDR) wynoszącym mniej niż 5% (Figura 2). Aby zidentyfikować minimalny zestaw genów zdolnych do przewidywania stanu tolerancji, przeprowadzono analizę predykcyjną mikromacierzy (PAM) równolegle na tych samych 2 grupach próbek, co doprowadziło do identyfikacji podzbioru 26 sond odpowiadających 24 genom (wszystkie z są one obecne na liście SAM, Figura 3A) zdolne do prawidłowej klasyfikacji tolerancyjnych biorców, z ogólnym poziomem błędu wynoszącym 0,026 (czułość, 1, specyficzność, 0,944). Następnie przeprowadzono wielowymiarową analizę skalowania w celu wizualnego przedstawienia bliskości próbek TOL i innych niż TOL zgodnie z ekspresją 26 sond.
[patrz też: licówki porcelanowe cennik, przychodnia władysławowo, samotne dziewczyny szukajace chłopaków ]
[więcej w: balsam szostakowskiego zastosowanie, coleus forskohlii opinie, chirurgia plastyczna szczecin ]